Vliv kouření na periimplantitidu

Průřezová studie bude provedena ve spolupráci s katedrami parodontologie na Fakultě zubního lékařství Bernské univerzity ve Švýcarsku, Hatay Mustafa Kemal University, Dokuz Eylul University, Gazi University a Ege University v Turecku. První krok studie bude proveden v Turecku a druhý krok ve Švýcarsku. Vzhledem k tomu, že Hatay je jednou ze tří provincií nejvíce postižených zemětřesením v roce 2023 v Turecku a zubní škola Hatay Mustafa Kemal University Dental School byla vážně poškozena, není možné získat vzorky od pacientů v Hatay. Proto byl tento projekt naplánován jako multicentrum a vzorky pacientů budou získávány z Dokuz Eylül, Gazi University, a Ege University, Ústav parodontologie, Fakulty zubního lékařství. Vzorky budou analyzovány v Laboratoři orální mikrobiologie, Ústav parodontologie, Univerzita v Bernu, Švýcarsko. Protokol studie byl schválen Etickou komisí pro využití lidských subjektů ve výzkumu Univerzity Dokuz Eylul (č. protokolu: 2023/GOA-8246).

Tato studie bude zahrnovat 96 pacientů rovnoměrně rozdělených do čtyř skupin:

• Kuřáci s periimplantitidou
• Nekuřáci s periimplantitidou
• Kuřáci se zdravými periimplantátovými tkáněmi
• Nekuřáci se zdravou periimplantační tkání

Stav kuřáků bude rozdělen do dvou skupin: kuřák a nekuřák (nikdy nekuřák). Do skupiny nekuřáků budou patřit bývalí kuřáci, kteří přestali kouřit minimálně před 6 lety.

Vypočítá se počet vykouřených cigaret za den, kuřácký index (sebeuvedený průměr cigaret za den x roky užívání tabáku) a kuřácký kapesný rok (vlastně vykázaný průměr cigaret za den x roky užívání tabáku / počet cigaret za rok kapsa). Stav kouření bude zjištěn podle vlastního hlášení. Stav kouření bude později potvrzen hladinami kotininu ve slinách. Koncentrace kotininu ve slinách pro kouření bude přijatelná na 5-7 ng/ml. Závažnost kouření bude určena vyššími koncentracemi.

Parametry parodontu Klinická měření parodontu budou vyhodnocena pomocí následujících postupů pro diagnostiku parodontu. Měření budou provedena pomocí Williamsovy periodontální sondy (Hu-Friedy, Chicago, IL, USA) a budou zahrnovat hloubku sondy (PPD), úroveň klinického připojení (CAL), index plaku (PI) 26, gingivální index (GI) 27, a procento krvácení při sondování (BOP) 28 na šesti místech na zub (mezio-bukální, bukální, disto-bukální, meziolingvální, lingvální a disto-lingvální) na každém zubu.

Diagnóza onemocnění a stavů parodontu bude prováděna podle radiografických a klinických diagnostických kritérií navržených v roce 2017 na Světovém workshopu o klasifikaci onemocnění a stavů parodontu a periimplantátu. zánět, krvácení při sondáži a další úbytek kostní hmoty po počátečním hojení, který by neměl být ≥2 mm. Kritéria pro pacienty s periimplantitidou budou PPD≥6 mm ve spojení s profuzním krvácením a ≥3 mm kostní ztrátou.

Demografie pacienta a klinické periodontální/periimplantační vyšetření

Budou shromažďovány následující proměnné:

• Rod
• Stáří
• BMI
• Věk implantátů
• Počet a umístění implantátů
• Kroky chirurgické fáze
• Komplikace spojené s implantací
• Nesprávné umístění implantátu
• Mobilita a nepohodlí implantátu (rozdíly v hodnotách Periotest-PTV)
• Doba od vložení implantátů do aktuálního vyšetření (doba ve funkci)
• Restorativní design
• Retence protézy
• Rentgenová úroveň kosti
• Druh a velikost kostního defektu
• Přítomnost keratinizované sliznice
• Frekvence čištění zubů
• Interproximální čištění nití/kartáčováním
• Frekvence návštěv u zubaře
• Anamnéza parodontitidy
• Důvod ztráty zubů
• Užívání alkoholu

Sběr slin

Vzorky slin budou od pacientů odebírány jako nestimulované. Vzorky budou získány během 10 minut, když budou účastníci sedět. Vzorky budou uchovávány při teplotě -80 °C, dokud nebudou převedeny na Oddělení parodontologie Fakulty zubního lékařství Univerzity v Bernu v suchém ledu pro analýzy.

Sbírka vzorků plaků

Vzorky plaku budou odebrány ze subgingivální oblasti periimplantitidy a parodontitidy ve skupině periimplantitidy az oblasti zdravého periodontu a zdravého periimplantátu ze subgingivální oblasti periimplantátu. Vzorky subgingiválního implantátu a zubního plaku budou odebrány ze dvou nejhlubších periodontálních kapes a periimplantátových kapes v rámci 200 μl RNAlater ve zkumavkách Eppendorf. Místa odběru vzorků budou izolována od slin a mírně vysušena na vzduchu. Vzorek bude odebrán pomocí sterilní Gracey kyrety (HuFriedy, Rotterdam, Nizozemsko). Vzorky budou odebrány z oblasti zdraví periimplantátu stejnou metodou ve skupině zdraví periimplantátu. Mikrocentrifugační zkumavky Eppendorf budou skladovány při -80 °C, dokud nebudou přeneseny do Ústavu zubního lékařství, Bern University, v suchém ledu pro analýzy.

Odběr vzorků gingivální crevikulární tekutiny (GCF) a periimplantátové sulcusové tekutiny (PISF)

Vzorky budou odebrány ze dvou nejhlubších periimplantátových kapes a dvou nejhlubších periodontálních kapes od pacientů s periimplantitidou. Kontaminaci slinami zabráníte izolováním každé oblasti bavlněnými smotky a mírnou dehydratací vzduchem. Plak bude jemně odstraněn pomocí parodontální kyrety. Použitím otvorové metody 39 budou vzorky získány během 30 sekund se standardizovanými papírovými proužky (Periopaper; Oraflow Inc., Plainview, NY). Objemy budou měřeny na předem kalibrovaném elektronickém zařízení pro měření gingiválních tekutin (Oraflow Inc., Plainview, NY). 40 Údaje z elektronického zařízení budou převedeny na skutečný objem (μl) odkazem na standardní křivku. Vzorky kontaminované krví nebo slinami budou vyloučeny. Všech šest proužků Periopaper bude sloučeno do plastových mikrocentrifugačních zkumavek Eppendorf a skladováno při -80 °C, dokud nebudou přeneseny do Ústavu zubního lékařství, Bern University, v suchém ledu pro analýzy.

Laboratorní rozbory

Vzorky slin a plaku budou přeneseny do Laboratoře orální mikrobiologie, Ústav parodontologie Fakulty zubního lékařství Univerzity v Bernu a veškeré laboratorní analýzy provede Dr. Aysegul Sari v Laboratoři orální mikrobiologie, Ústav parodontologie, Škola of Dental Medicine, University of Bern, Švýcarsko po podepsání smlouvy o převodu materiálu.

Biochemická analýza

Stav kouření pacientů bude stanoven analýzou kotininu pomocí soupravy pro enzymatické imunoanalýzy ve vzorcích slin.

Mikrobiologická analýza

Bude analyzována přítomnost a četnost Fusobacterium nucleatum, Campylobacter rectus, Prevotella intermedia, Aggregatinacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Saccharibacteria (TM7), Streptococcus aureyces nebo Actin bei aureyces. Cílená identifikace těchto bakterií bude provedena pomocí Real Time Q-PCR. Sekvenování 16sRNA bude použito pro nezaujatou a necílenou mikrobiologickou analýzu. Celková genomová DNA bude extrahována a poté bude provedena amplifikace 16S rRNA.

Analýza GCF

Analýza GCF je plánována jako druhá studie. K provedení analýzy vzorků GCF a slin bude použita multiplexní imunoanalýza na bázi perliček Luminex. Markery GCF a slin byly široce selektovány podle předchozí literatury jako markery oxidačního stresu 8-OHdG, PARK7/DJ-1 a zánětlivé markery NADPH oxidázy IL-1beta, IL-17A/E, osteoprotegerin (OPG); markery degradace pojivové tkáně MMP-8, MMP-3; markery opravy/regenerace kostního morfogenního proteinu (BMP)-2, epidermálního růstového faktoru (EGF) a vaskulárního endoteliálního růstového faktoru (VEGF).

Statistická analýza

Vzhledem k tomu, že v literatuře neexistuje žádná podobná studie, byl výpočet vzorku proveden na základě velikosti účinku. Potřebná velikost vzorku byla 24 pro každou skupinu k detekci významného rozdílu při velikosti účinku (velká velikost účinku) 0,4 a úrovni síly 90 % s 95% úrovní spolehlivosti mezi čtyřmi skupinami. Pro výpočty velikosti vzorků byl použit balíček Gpower verze 3.1. Normalita spojitých proměnných bude hodnocena Shapiro-Wilkovým testem. Pro hodnoty se zkresleným rozdělením budou provedeny neparametrické statistické metody. Kruskal-Wallisův test bude proveden pro porovnání více než dvou nenormálně distribuovaných proměnných a Dunnův vícenásobný srovnávací test pro post hoc párové vícenásobné srovnávací analýzy. Jednocestný test ANOVA bude proveden pro srovnání více než dvou normálně rozdělených skupin a Tukeyho test bude proveden pro post hoc párové vícenásobné srovnávací analýzy. Budou provedeny obecné lineární modely ke stanovení účinku závažnosti kouření na periimplantát a periodontální onemocnění.