Effekten av røyking på peri-implantitt

Tverrsnittsstudien vil bli utført i samarbeid med avdelingene for periodontologi ved Det odontologiske fakultet ved Bern University, Sveits, Hatay Mustafa Kemal University, Dokuz Eylul University, Gazi University, og Ege University, Tyrkia. Det første trinnet i studien vil bli utført i Tyrkia, og det andre trinnet i Sveits. Siden Hatay er en av de tre provinsene som er mest berørt av jordskjelvet i Tyrkia i 2023 og Hatay Mustafa Kemal University Dental School ble alvorlig skadet, er det umulig å rekruttere prøver fra pasientene i Hatay. Derfor er dette prosjektet planlagt som et multisenter, og pasientprøver vil bli rekruttert fra Dokuz Eylül, Gazi University, og Ege University, Institutt for periodontologi, Det odontologiske fakultet. Prøvene vil bli analysert i Laboratory of Oral Microbiology, Institutt for periodontologi, Universitetet i Bern, Sveits. Studieprotokollen ble godkjent av Etikkkomiteen for bruk av mennesker i forskning ved Dokuz Eylul University (Protokoll nr: 2023/GOA-8246).

Denne studien vil omfatte 96 pasienter, likt delt inn i fire grupper:

• Røykere med peri-implantitt
• Ikke-røykere med peri-implantitt
• Røykere med sunt peri-implantat vev
• Ikke-røykere med sunt peri-implantat vev

Røykestatus vil bli kategorisert i to grupper: røyker og ikke-røyker (aldri røyker). Ikke-røykergruppen vil omfatte tidligere røykere som sluttet å røyke for minst 6 år siden.

Sigarettene som røykes per dag, røykeindeksen (selvrapportert gjennomsnittlig sigaretter per dag x år med tobakksbruk), og røykelommen år vil bli beregnet (selvrapportert gjennomsnittlig sigaretter per dag x år med tobakksbruk / antall sigaretter i en lomme). Røykestatus vil bli oppdaget i henhold til egenmelding. Røykestatus vil senere bli validert av spyttkotininnivåer. Spytt-kotininkonsentrasjon for røyking vil bli akseptert ved 5-7 ng/ml. Alvorlighetsgraden av røyking vil bli bestemt av høyere konsentrasjoner.

Periodontale parametre Kliniske periodontale målinger vil bli vurdert ved å bruke følgende for periodontal diagnose. Målingene vil utføres ved bruk av en Williams periodontal probe (Hu-Friedy, Chicago, IL, USA) og inkluderer sonderingslommedybde (PPD), klinisk festenivå (CAL), plakkindeks (PI) 26, gingivalindeks (GI) 27, og prosentvis blødning ved sondering (BOP) 28 på seks steder per tann (mesio-bukkal, bukkal, disto-bukkal, mesio-lingual, lingual og disto-lingual) på hver tann.

Diagnose av periodontale sykdommer og tilstander vil bli stilt i henhold til de radiografiske og kliniske diagnostiske kriteriene foreslått av 2017 World Workshop on Classification of Periodontal and Peri-implant Diseases and Conditions.29 Peri-implantatets helse vil bli vurdert ved fravær av visuelle tegn på betennelse, blødning ved sondering og ytterligere bentap etter første tilheling, som ikke bør være ≥2 mm. Kriteriene for pasienter med periimplantitt vil være PPD≥6 mm i forbindelse med kraftig blødning og ≥3 mm bentap.

Pasientdemografi og klinisk periodontal/peri-implantatundersøkelse

Følgende variabler vil bli samlet inn:

• Kjønn
• Alder
• BMI
• Implantat alder
• Antall og plassering av implantater
• Kirurgiske fasetrinn
• Komplikasjoner knyttet til implantatbehandling
• Feilplassering av implantatet
• Implantatmobilitet og ubehag (forskjeller i Periotest-verdier-PTVer)
• Tid fra lasting av implantater til nåværende undersøkelse (tid i funksjon)
• Restaurerende design
• Proteseoppbevaring
• Radiografisk beinnivå
• Type og størrelse på beindefekt
• Tilstedeværelse av keratinisert slimhinne
• Hyppighet av tannpuss
• Interproksimal bruk av tanntråd/børsting
• Hyppighet av tannlegetime
• Historie om periodontitt
• Årsak til tap av tenner
• Bruk av alkohol

Innsamling av spytt

Spyttprøver vil bli tatt fra pasienter som ustimulerte. Prøver vil bli innhentet i løpet av 10 minutter når deltakerne får plass. Prøvene vil bli oppbevart ved -80°C inntil de overføres til Institutt for periodontologi, School of Dental Medicine, University of Bern, i tørris for analysene.

Samling av plakkprøver

Plakkprøver vil bli tatt fra periimplantitt og periodontitt subgingivalområdet i periimplantittgruppen, og periodontalt friskt og periimplantat helse subgingivalområde i periimplantathelsegruppene. Subgingivalimplantat- og tannplakkprøver vil bli samlet inn fra de to dypeste periodontale lommene og peri-implantatlommene innenfor 200 μl RNAlater i Eppendorf-rør. Prøvetakingsstedene vil bli isolert fra spytt og lett lufttørket. Prøven vil bli tatt med en steril Gracey-kyrett (HuFriedy, Rotterdam, Nederland). Prøvene vil bli tatt fra periimplantat helseområde etter samme metode i periimplantat helsegruppe. Eppendorf mikrosentrifugerør vil bli lagret ved -80 °C til de overføres til Institutt for odontologi, Bern University, i tørris for analysene.

Samling av Gingival Crevicular Fluid (GCF) og Peri-implant Sulcus Fluid (PISF) prøver

Prøvene vil bli tatt fra to dypeste peri-implantatlommer og to dypeste periodontale lommer fra peri-implantittpasienter. Spyttforurensning vil unngås ved å isolere hvert område med bomullsruller og dehydrere litt med luft. Plakk fjernes forsiktig med en periodontal curette. Ved å bruke åpningsmetoden 39 vil prøvene fås innen 30 sekunder med standardiserte papirstrimler (Periopaper; Oraflow Inc., Plainview, NY). Volumene vil bli målt på en forhåndskalibrert elektronisk tannkjøttvæskemåleenhet (Oraflow Inc., Plainview, NY). 40 Avlesningene fra den elektroniske enheten vil bli konvertert til et faktisk volum (μl) ved referanse til en standardkurve. Prøver kontaminert med blod eller spytt vil bli ekskludert. Alle seks Periopaper-strimlene vil bli samlet i Eppendorf mikrosentrifugerør av plast og lagret ved -80 °C til de overføres til Institutt for odontologi, Bern University, i tørris for analysene.

Laboratorieanalyser

Spytt- og plakkprøver vil bli overført til Laboratoriet for Oral Mikrobiologi, Institutt for periodontologi, Institutt for tannmedisin, Universitetet i Bern og alle laboratorieanalyser vil bli utført av Dr. Aysegul Sari ved Laboratoriet for oral mikrobiologi, Institutt for periodontologi, Skolen of Dental Medicine, University of Bern, Sveits etter at materialoverføringsavtalen er signert.

Biokjemisk analyse

Pasienters røykestatus vil bli bestemt ved kotininanalyse ved bruk av et enzymimmunoassay-sett i spyttprøvene.

Mikrobiologisk analyse

Tilstedeværelsen og forekomsten av Fusobacterium nucleatum, Campylobacter rectus, Prevotella intermedia, Aggregatinacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema dentcola, Saccharibacteria (TM7), Streptococcus aureus og plaque-prøver, testinomyces eller aktinomyces. Den målrettede identifiseringen av disse bakteriene vil bli gjort av Real Time Q-PCR. 16sRNA-sekvensering vil bli brukt for en objektiv og umålrettet mikrobiologisk analyse. Totalt genomisk DNA vil bli ekstrahert, og deretter vil amplifisering av 16S rRNA bli utført.

GCF-analyse

GCF-analyse er planlagt som en andre studie. Luminex perlebasert multipleks immunoassay vil bli brukt til å utføre analysen av GCF og spyttprøver. GCF og spyttmarkører ble bredt utvalgt i henhold til tidligere litteratur som oksidativt stressmarkører 8-OHdG, PARK7/DJ-1 og NADPH oksidase inflammatoriske markører IL-1beta, IL-17A/E, osteoprotegerin (OPG); bindevevsnedbrytningsmarkører MMP-8, MMP-3; reparasjons-/regenereringsmarkører benmorfogent protein (BMP)-2, epidermal vekstfaktor (EGF) og vaskulær endotelial vekstfaktor (VEGF).

Statistisk analyse

Siden det ikke finnes en tilsvarende studie i litteraturen, ble prøveberegningen gjort på effektstørrelsen. Den nødvendige prøvestørrelsen var 24 for hver gruppe for å oppdage en signifikant forskjell ved en effektstørrelse (stor effektstørrelse) på 0,4 og et effektnivå på 90 % med et 95 % konfidensnivå mellom de fire gruppene. Gpower-pakkeversjon 3.1 ble brukt til prøvestørrelsesberegninger. Normaliteten til kontinuerlige variabler vil bli evaluert ved Shapiro-Wilks test. Ikke-parametriske statistiske metoder vil bli utført for verdier med skjevfordeling. Kruskal-Wallis test vil bli utført for å sammenligne mer enn to ikke-normalfordelte variabler, og Dunn multippel sammenligningstest for post hoc parvise multiple sammenligningsanalyser. En enveis ANOVA-test vil bli utført for å sammenligne mer enn to normalfordelte grupper, og Tukey-testen vil bli utført for post hoc parvise multiple sammenligningsanalyser. Generelle lineære modeller vil bli utført for å bestemme effekten av alvorlighetsgraden av røyking på periimplantat og periodontal sykdom.