Влияние курения на периимплантит

Поперечное исследование будет проводиться в сотрудничестве с кафедрами пародонтологии факультета стоматологии Бернского университета, Швейцария, Университета Хатая Мустафы Кемаля, Университета Докуз Эйлюля, Университета Гази и Университета Эге, Турция. Первый этап исследования будет проведен в Турции, а второй – в Швейцарии. Поскольку Хатай является одной из трех провинций Турции, наиболее пострадавших от землетрясения 2023 года, а стоматологическая школа Университета Хатая Мустафы Кемаля серьезно пострадала, невозможно собрать образцы у пациентов в Хатае. Поэтому этот проект планировался как многоцентровый, и образцы пациентов будут отобраны из Докуз Эйлюля, Университета Гази и Университета Эге, кафедры пародонтологии, факультета стоматологии. Образцы будут проанализированы в лаборатории микробиологии полости рта кафедры пародонтологии Бернского университета, Швейцария. Протокол исследования был одобрен Комитетом по этике использования людей в исследованиях Университета Докуз Эйлюл (Протокол №: 2023/GOA-8246).

В это исследование войдут 96 пациентов, поровну разделенных на четыре группы:

• Курильщики с периимплантитом
• Некурящие люди с периимплантитом
• Курильщики со здоровыми тканями вокруг имплантата
• Некурящие люди со здоровыми тканями вокруг имплантата

Статус курения будет разделен на две группы: курильщик и некурящий (никогда не куривший). В группу некурящих будут включены бывшие курильщики, бросившие курить не менее 6 лет назад.

Будут рассчитаны количество выкуриваемых в день сигарет, индекс курения (среднее количество сигарет в день, о которых сообщают сами х годы употребления табака), и карманный год курения (среднее количество сигарет, о которых сообщают сами люди в день, х годы употребления табака / количество сигарет в карман). Статус курения будет определен по данным самоотчета. Статус курения позже будет подтвержден уровнем котинина в слюне. Концентрацию котинина в слюне для курения примут на уровне 5-7 нг/мл. Тяжесть курения будет определяться более высокими концентрациями.

Параметры пародонта. Клинические измерения пародонта будут оцениваться с использованием следующих методов диагностики пародонта. Измерения будут выполняться с использованием пародонтального зонда Williams (Hu-Friedy, Чикаго, Иллинойс, США) и включать глубину зондирующего кармана (PPD), уровень клинического прикрепления (CAL), индекс зубного налета (PI) 26, десневой индекс (GI) 27, и процент кровотечения при зондировании (BOP) 28 в шести местах на зуб (мезио-щечная, щечная, дисто-щечная, мезио-лингвальная, лингвальная и дисто-лингвальная) на каждом зубе.

Диагностика заболеваний и состояний пародонта будет проводиться в соответствии с рентгенографическими и клиническими диагностическими критериями, предложенными Всемирным семинаром 2017 года по классификации заболеваний и состояний пародонта и периимплантата.29 Здоровье периимплантата будет оцениваться по отсутствию визуальных признаков воспаление, кровотечение при зондировании и дальнейшая потеря костной массы после первоначального заживления, которая не должна составлять ≥2 мм. Критериями для пациентов с периимплантитом будут PPD≥6 мм в сочетании с обильным кровотечением и потерей костной массы ≥3 мм.

Демографические данные пациентов и клиническое обследование пародонта/периимплантата

Будут собраны следующие переменные:

• Пол
• Возраст
• ИМТ
• Возраст имплантата
• Количество и расположение имплантатов
• Этапы хирургического этапа
• Осложнения, связанные с имплантацией
• Неправильное положение имплантата
• Подвижность имплантата и дискомфорт (различия в значениях периотеста – PTV)
• Время от установки имплантатов до текущего обследования (время функционирования)
• Реставрационный дизайн
• Ретенция протеза
• Рентгенологический уровень кости
• Вид и размер костного дефекта
• Наличие ороговевшей слизистой оболочки.
• Частота чистки зубов
• Интерпроксимальная чистка зубов/зубная нить
• Частота посещения стоматолога
• История пародонтита
• Причина потери зуба
• Употребление алкоголя

Сбор слюны

Образцы слюны будут получаться у пациентов в нестимулированном виде. Образцы будут получены в течение 10 минут, когда участники сядут. Образцы будут храниться при температуре -80°C до передачи в отделение пародонтологии Школы стоматологической медицины Бернского университета в сухом льду для проведения анализов.

Сбор образцов зубного налета

Образцы налета будут взяты из поддесневой области периимплантита и пародонтита в группе периимплантита, а также из поддесневой области здорового пародонта и здоровья периимплантата в группах здоровья периимплантата. Образцы поддесневого имплантата и зубного налета будут взяты из двух самых глубоких пародонтальных карманов и периимплантатных карманов в пределах 200 мкл РНК позже в пробирки Эппендорфа. Места отбора проб будут изолированы от слюны и слегка высушены на воздухе. Образец будет собран с использованием стерильной кюретки Грейси (HuFriedy, Роттердам, Нидерланды). Образцы будут взяты из зоны здоровья вокруг имплантата тем же методом, что и в группе здоровья вокруг имплантата. Микроцентрифужные пробирки Eppendorf будут храниться при температуре -80 °C до передачи в Институт стоматологии Бернского университета в сухом льду для проведения анализов.

Сбор образцов жидкости десневой борозды (GCF) и жидкости периимплантатной борозды (PISF).

Образцы будут взяты из двух самых глубоких периимплантатных карманов и двух самых глубоких пародонтальных карманов у пациентов с периимплантитом. Загрязнения слюной можно избежать, изолируя каждый участок ватными палочками и слегка обезвоживая его воздухом. Налет аккуратно удаляется с помощью пародонтальной кюретки. При использовании метода отверстия 39 образцы будут получены в течение 30 секунд с помощью стандартизированных бумажных полосок (Periopaper; Oraflow Inc., Плейнвью, Нью-Йорк). Объемы будут измеряться с помощью предварительно откалиброванного электронного устройства для измерения десневой жидкости (Oraflow Inc., Плейнвью, Нью-Йорк). 40 Показания электронного устройства будут преобразованы в фактический объем (мкл) по стандартной кривой. Образцы, загрязненные кровью или слюной, исключаются. Все шесть полосок Periopaper будут помещены в пластиковые микроцентрифужные пробирки Eppendorf и храниться при -80 °C до передачи в Институт стоматологии Бернского университета в сухом льду для анализа.

Лабораторные анализы

Образцы слюны и зубного налета будут переданы в лабораторию микробиологии полости рта кафедры пародонтологии факультета стоматологической медицины Бернского университета, а все лабораторные анализы будут выполнены доктором Айсегуль Сари в лаборатории микробиологии полости рта кафедры пародонтологии школы. стоматологической медицины Бернского университета, Швейцария, после подписания соглашения о передаче материалов.

Биохимический анализ

Статус курения пациентов будет определяться с помощью анализа котинина с использованием набора для иммуноферментного анализа в образцах слюны.

Микробиологический анализ

В образцах зубного налета будет проанализировано наличие и численность Fusobacterium nucleatum, Campylobacter rectus, Prevotella intermedia, Aggregatinacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Saccharibacteria (TM7), Streptococcus aureus и Actinomyces oris. Целенаправленная идентификация этих бактерий будет осуществляться с помощью Q-PCR в реальном времени. Секвенирование 16sRNA будет использоваться для беспристрастного и нецелевого микробиологического анализа. Будет выделена полная геномная ДНК, а затем будет проведена амплификация 16S рРНК.

анализ ЗКФ

Анализ ЗКФ запланирован как второе исследование. Мультиплексный иммуноанализ на основе шариков Luminex будет использоваться для анализа образцов GCF и слюны. Маркеры GCF и слюны были широко выбраны в соответствии с предыдущей литературой в качестве маркеров окислительного стресса 8-OHdG, PARK7/DJ-1 и НАДФН-оксидазы, воспалительных маркеров IL-1beta, IL-17A/E, остеопротегерина (OPG); маркеры деградации соединительной ткани ММП-8, ММП-3; маркеры репарации/регенерации костный морфогенный белок (BMP)-2, эпидермальный фактор роста (EGF) и фактор роста эндотелия сосудов (VEGF).

Статистический анализ

Поскольку подобных исследований в литературе нет, выборочный расчет был сделан по величине эффекта. Необходимый размер выборки составлял 24 человека для каждой группы, чтобы обнаружить значительную разницу при размере эффекта (большом размере эффекта) 0,4 и уровне мощности 90% с уровнем достоверности 95% между четырьмя группами. Для расчета размера выборки использовалась версия пакета Gpower 3.1. Нормальность непрерывных переменных будет оцениваться с помощью теста Шапиро-Уилка. Непараметрические статистические методы будут применяться для значений с асимметричным распределением. Тест Крускала-Уоллиса будет выполняться для сравнения более двух переменных с ненормальным распределением, а тест множественного сравнения Данна для апостериорного анализа попарных множественных сравнений. Односторонний тест ANOVA будет выполняться для сравнения более двух нормально распределенных групп, а тест Тьюки будет выполняться для апостериорного анализа попарных множественных сравнений. Общие линейные модели будут использоваться для определения влияния тяжести курения на заболевания периимплантата и пародонта.