Het effect van roken op peri-implantitis

Het cross-sectionele onderzoek zal worden uitgevoerd in samenwerking met de afdelingen Parodontologie van de Faculteit Tandheelkunde van de Universiteit van Bern, Zwitserland, Hatay Mustafa Kemal Universiteit, Dokuz Eylul Universiteit, Gazi Universiteit en Ege Universiteit, Turkije. De eerste stap van het onderzoek zal worden uitgevoerd in Turkije, en de tweede stap in Zwitserland. Omdat Hatay een van de drie provincies is die het zwaarst getroffen zijn door de aardbeving van 2023 in Turkije en de Hatay Mustafa Kemal University Dental School ernstig beschadigd is, is het onmogelijk om monsters te verzamelen van de patiënten in Hatay. Daarom is dit project gepland als een multicenter, en zullen patiëntenmonsters worden gerekruteerd van de Dokuz Eylül, Gazi Universiteit en Ege Universiteit, Afdeling Parodontologie, Faculteit Tandheelkunde. De monsters zullen worden geanalyseerd in het Laboratorium voor Orale Microbiologie, Afdeling Parodontologie, Universiteit van Bern, Zwitserland. Het onderzoeksprotocol werd goedgekeurd door de Ethische Commissie voor het gebruik van menselijke proefpersonen in onderzoek van de Dokuz Eylul Universiteit (Protocol nr.: 2023/GOA-8246).

Aan deze studie zullen 96 patiënten deelnemen, gelijkelijk verdeeld in vier groepen:

• Rokers met peri-implantitis
• Niet-rokers met peri-implantitis
• Rokers met gezond peri-implantaatweefsel
• Niet-rokers met gezond peri-implantaatweefsel

De rookstatus wordt onderverdeeld in twee groepen: roker en niet-roker (nooit roker). Tot de niet-rokersgroep behoren ex-rokers die minimaal zes jaar geleden zijn gestopt met roken.

De sigaretten die per dag worden gerookt, de rookindex (zelfgerapporteerde gemiddelde sigaretten per dag x jaar tabaksgebruik) en het rokerszakjaar worden berekend (zelfgerapporteerde gemiddelde sigaretten per dag x jaar tabaksgebruik / het aantal sigaretten in een zak). De rookstatus wordt gedetecteerd op basis van zelfrapportage. De rookstatus zal later worden gevalideerd door de cotininespiegels in het speeksel. De cotinineconcentratie in het speeksel voor roken wordt geaccepteerd op 5-7 ng/ml. De ernst van het roken zal worden bepaald door hogere concentraties.

Parodontale parameters Klinische parodontale metingen zullen worden beoordeeld met behulp van het volgende voor parodontale diagnose. De metingen zullen worden uitgevoerd met behulp van een Williams parodontale sonde (Hu-Friedy, Chicago, IL, VS) en omvatten het indringen van de pocketdiepte (PPD), het klinische hechtingsniveau (CAL), plaque-index (PI) 26, gingivale index (GI) 27, en percentage bloeding bij sonderen (BOP) 28 op zes plaatsen per tand (mesio-buccaal, buccaal, disto-buccaal, mesio-linguaal, linguaal en disto-linguaal) op elke tand.

De diagnose van parodontale ziekten en aandoeningen zal worden gesteld volgens de radiografische en klinische diagnostische criteria die zijn voorgesteld door de World Workshop on Classification of Periodontal and Peri-implant Diseases and Condities van 2017.29 De peri-implantaire gezondheid zal worden beoordeeld aan de hand van de afwezigheid van visuele tekenen van parodontitis. ontsteking, bloeding bij sonderen en verder botverlies na initiële genezing, dat niet ≥2 mm mag zijn. De criteria voor patiënten met peri-implantitis zijn PPD ≥6 mm in combinatie met hevige bloedingen en ≥3 mm botverlies.

Demografische gegevens van patiënten en klinisch parodontaal/peri-implantaatonderzoek

De volgende variabelen worden verzameld:

• Geslacht
• Leeftijd
• BMI
• Leeftijd van het implantaat
• Aantal en locatie van implantaten
• Chirurgische fasestappen
• Complicaties gerelateerd aan implantaatbehandeling
• Verkeerde plaatsing van het implantaat
• Mobiliteit en ongemak van implantaten (verschillen in Periotest-waarden-PTV's)
• Tijd vanaf het laden van implantaten tot het huidige onderzoek (tijd in functie)
• Herstellend ontwerp
• Prothese retentie
• Radiologisch botniveau
• Soort en grootte van het botdefect
• Aanwezigheid van verhoornd slijmvlies
• Frequentie van tandenpoetsen
• Interproximaal flossen/poetsen
• Frequentie van tandartsbezoek
• Geschiedenis van parodontitis
• Reden voor tandverlies
• Alcoholgebruik

Verzameling van speeksel

Er worden speekselmonsters van patiënten afgenomen als ongestimuleerd. Monsters worden gedurende 10 minuten verkregen wanneer de deelnemers gaan zitten. De monsters worden bij -80°C bewaard totdat ze voor de analyses in droogijs worden overgebracht naar de afdeling Parodontologie, School voor Tandheelkunde, Universiteit van Bern.

Verzameling van plaquemonsters

Er zullen tandplakmonsters worden genomen uit het peri-implantitis en subgingivale parodontitisgebied in de peri-implantitisgroep, en uit het parodontale gezonde en peri-implantaire subgingivale gebied in de peri-implantaire gezondheidsgroepen. Subgingivale implantaat- en tandplakmonsters zullen later in Eppendorf-buisjes worden verzameld uit de twee diepste parodontale zakken en peri-implantaire zakken binnen 200 μl RNA. De bemonsteringsplaatsen worden geïsoleerd van speeksel en lichtjes aan de lucht gedroogd. Het monster wordt verzameld met behulp van een steriele Gracey-curette (HuFriedy, Rotterdam, Nederland). De monsters zullen op dezelfde manier in de peri-implantaire gezondheidsruimte worden genomen als in de peri-implantaire gezondheidsgroep. Eppendorf-microcentrifugebuisjes zullen bij -80 °C worden bewaard totdat ze voor de analyses in droogijs worden overgebracht naar het Instituut voor Tandheelkunde, Universiteit van Bern.

Verzameling van monsters van tandvleescreviculair vocht (GCF) en peri-implantaat sulcusvocht (PISF)

De monsters zullen worden genomen uit de twee diepste peri-implantaatpockets en de twee diepste parodontale pockets van peri-implantitispatiënten. Speekselbesmetting wordt vermeden door elk gebied te isoleren met wattenrolletjes en lichtjes te drogen met lucht. Tandplak wordt voorzichtig verwijderd met behulp van een parodontale curette. Met behulp van de openingsmethode zullen de monsters binnen 30 seconden worden verkregen met gestandaardiseerde papieren stroken (Periopaper; Oraflow Inc., Plainview, NY). De volumes zullen worden gemeten op een vooraf gekalibreerd elektronisch gingivale vloeistofmeetapparaat (Oraflow Inc., Plainview, NY). 40 De meetwaarden van het elektronische apparaat worden omgezet naar een feitelijk volume (μl) aan de hand van een standaardcurve. Monsters die besmet zijn met bloed of speeksel worden uitgesloten. Alle zes Periopaper-strips zullen worden samengevoegd in plastic Eppendorf-microcentrifugebuizen en bij -80 ° C worden bewaard totdat ze voor de analyses in droogijs worden overgebracht naar het Instituut voor Tandheelkunde, Universiteit van Bern.

Laboratoriumanalyses

Speeksel- en tandplakmonsters zullen worden overgebracht naar het Laboratorium voor Orale Microbiologie, Afdeling Parodontologie, School voor Tandheelkunde, Universiteit van Bern en alle laboratoriumanalyses zullen worden uitgevoerd door Dr. Aysegul Sari van het Laboratorium voor Orale Microbiologie, Afdeling Parodontologie, School of Dental Medicine, Universiteit van Bern, Zwitserland nadat de overeenkomst voor materiaaloverdracht is ondertekend.

Biochemische analyse

De rookstatus van patiënten zal worden bepaald door cotinineanalyse met behulp van een enzymimmunoassaykit in de speekselmonsters.

Microbiologische analyse

De aanwezigheid en overvloed van Fusobacterium nucleatum, Campylobacter rectus, Prevotella intermedia, Aggregatinacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Saccharibacteria (TM7), Streptococcus aureus en Actinomyces oris zullen worden geanalyseerd in plaquemonsters. De gerichte identificatie van deze bacteriën zal gebeuren door middel van Real Time Q-PCR. 16sRNA-sequencing zal worden gebruikt voor een onbevooroordeelde en ongerichte microbiologische analyse. Totaal genomisch DNA zal worden geëxtraheerd en vervolgens zal amplificatie van het 16S-rRNA worden uitgevoerd.

GCF-analyse

GCF-analyse is gepland als een tweede onderzoek. Luminex-kralengebaseerde multiplex-immunoassay zal worden gebruikt om de analyse van GCF- en speekselmonsters uit te voeren. GCF- en speekselmarkers werden volgens eerdere literatuur breed geselecteerd als markers voor oxidatieve stress 8-OHdG, PARK7/DJ-1 en NADPH-oxidase-inflammatoire markers IL-1beta, IL-17A/E, osteoprotegerine (OPG); merkers voor afbraak van bindweefsel MMP-8, MMP-3; reparatie-/regeneratiemarkers botmorfogeen eiwit (BMP)-2, epidermale groeifactor (EGF) en vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF).

Statistische analyse

Omdat er in de literatuur geen vergelijkbaar onderzoek bestaat, is de steekproefberekening gemaakt op basis van de effectgrootte. De benodigde steekproefgrootte was 24 voor elke groep om een ​​significant verschil te detecteren bij een effectgrootte (grote effectgrootte) van 0,4 en een powerniveau van 90% met een betrouwbaarheidsniveau van 95% tussen de vier groepen. Gpower-pakketversie 3.1 werd gebruikt voor berekeningen van de steekproefomvang. De normaliteit van continue variabelen zal worden geëvalueerd door de test van Shapiro-Wilk. Niet-parametrische statistische methoden zullen worden uitgevoerd voor waarden met een scheve verdeling. De Kruskal-Wallis-test zal worden uitgevoerd om meer dan twee niet-normaal verdeelde variabelen te vergelijken, en de Dunn-test voor meervoudige vergelijking voor post-hoc paarsgewijze meervoudige vergelijkingsanalyses. Er zal een one-way ANOVA-test worden uitgevoerd om meer dan twee normaal verdeelde groepen te vergelijken, en de Tukey-test zal worden uitgevoerd voor post-hoc paarsgewijze meervoudige vergelijkingsanalyses. Er zullen algemene lineaire modellen worden uitgevoerd om het effect van de ernst van het roken op peri-implantaire en parodontitisziekten te bepalen.