L'effetto del fumo sulla perimplantite

Lo studio trasversale sarà condotto in collaborazione con i Dipartimenti di Parodontologia della Facoltà di Odontoiatria dell'Università di Berna, Svizzera, dell'Università Hatay Mustafa Kemal, dell'Università Dokuz Eylul, dell'Università Gazi e dell'Università di Ege, Turchia. La prima fase dello studio sarà condotta in Turchia, la seconda in Svizzera. Poiché Hatay è una delle tre province più colpite dal terremoto del 2023 in Turchia e la Hatay Mustafa Kemal University Dental School è stata gravemente danneggiata, è impossibile reclutare campioni dai pazienti di Hatay. Pertanto, questo progetto è stato pianificato come multicentrico e i campioni dei pazienti saranno reclutati dal Dokuz Eylül, Università di Gazi e dall'Università di Ege, Dipartimento di Parodontologia, Facoltà di Odontoiatria. I campioni verranno analizzati nel Laboratorio di Microbiologia Orale, Dipartimento di Parodontologia, Università di Berna, Svizzera. Il protocollo dello studio è stato approvato dal Comitato Etico per l'Uso di Soggetti Umani nella Ricerca dell'Università Dokuz Eylul (Protocollo n.: 2023/GOA-8246).

Questo studio includerà 96 pazienti, equamente divisi in quattro gruppi:

• Fumatori con perimplantite
• Soggetti non fumatori con perimplantite
• Fumatori con tessuti perimplantari sani
• Soggetti non fumatori con tessuti perimplantari sani

Lo stato di fumatore sarà classificato in due gruppi: fumatore e non fumatore (mai fumatore). Il gruppo dei non fumatori includerà gli ex fumatori che hanno smesso di fumare almeno 6 anni fa.

Verranno calcolate le sigarette fumate al giorno, l'indice del fumo (media delle sigarette autodichiarate al giorno x anni di uso del tabacco) e l'anno tascabile del fumo (media delle sigarette autodichiarate al giorno x anni di uso del tabacco / il numero di sigarette in un tasca). Lo stato di fumatore verrà rilevato in base all'auto-segnalazione. Lo stato di fumatore sarà successivamente convalidato dai livelli di cotinina nella saliva. La concentrazione di cotinina salivare per il fumo sarà accettata a 5-7 ng/ml. La gravità del fumo sarà determinata da concentrazioni più elevate.

Parametri parodontali Le misurazioni cliniche parodontali saranno valutate utilizzando quanto segue per la diagnosi parodontale. Le misurazioni verranno eseguite utilizzando una sonda parodontale Williams (Hu-Friedy, Chicago, IL, USA) e includeranno la profondità di sondaggio della tasca (PPD), il livello di attacco clinico (CAL), l'indice di placca (PI) 26, l'indice gengivale (GI) 27, e percentuale di sanguinamento al sondaggio (BOP) 28 in sei siti per dente (mesio-buccale, buccale, disto-buccale, mesio-linguale, linguale e disto-linguale) su ciascun dente.

La diagnosi delle malattie e delle condizioni parodontali verrà effettuata secondo i criteri diagnostici radiografici e clinici proposti dal World Workshop 2017 sulla classificazione delle malattie e condizioni parodontali e perimplantari.29 La salute perimplantare sarà valutata dall'assenza di segni visivi di infiammazione, sanguinamento al sondaggio e ulteriore perdita ossea dopo la guarigione iniziale, che non deve essere ≥ 2 mm. I criteri per i pazienti con perimplantite saranno PPD≥6 mm in combinazione con sanguinamento abbondante e perdita ossea ≥3 mm.

Dati demografici del paziente ed esame clinico parodontale/periimplantare

Verranno raccolte le seguenti variabili:

• Genere
• Età
• BMI
• Età dell'impianto
• Numero e posizione degli impianti
• Fasi della fase chirurgica
• Complicazioni legate al trattamento implantare
• Malposizione dell'impianto
• Mobilità e disagio dell'impianto (differenze nei valori Periotest-PTV)
• Tempo dal caricamento degli impianti all'esame attuale (tempo in funzione)
• Progettazione restaurativa
• Ritenzione della protesi
• Livello osseo radiografico
• Tipo e dimensione del difetto osseo
• Presenza di mucosa cheratinizzata
• Frequenza dello spazzolamento dentale
• Uso del filo interdentale/spazzolino interprossimale
• Frequenza della visita dal dentista
• Storia della parodontite
• Motivo della perdita dei denti
• Uso di alcol

Raccolta della saliva

I campioni di saliva saranno ottenuti da pazienti non stimolati. I campioni verranno ottenuti in 10 minuti quando i partecipanti saranno seduti. I campioni verranno conservati a -80°C fino al momento del trasferimento al Dipartimento di Parodontologia, Facoltà di Odontoiatria, Università di Berna, in ghiaccio secco per le analisi.

Raccolta di campioni di placca

I campioni di placca verranno prelevati dall'area sottogengivale della perimplantite e della parodontite nel gruppo della perimplantite e dall'area sottogengivale con salute parodontale e perimplantare nei gruppi con salute periimplantare. I campioni di impianti sottogengivali e placca dentale verranno raccolti dalle due tasche parodontali più profonde e dalle tasche peri-implantari entro 200 μl di RNA successivamente in provette Eppendorf. I siti di campionamento verranno isolati dalla saliva e leggermente asciugati all'aria. Il campione verrà raccolto utilizzando una curette Gracey sterile (HuFriedy, Rotterdam, Paesi Bassi). I campioni verranno prelevati dall'area sanitaria perimplantare con lo stesso metodo utilizzato nel gruppo sanitario perimplantare. Le provette per microcentrifuga Eppendorf verranno conservate a -80 °C fino al trasferimento all'Istituto di Odontoiatria dell'Università di Berna, in ghiaccio secco per le analisi.

Raccolta di campioni di fluido crevicolare gengivale (GCF) e di fluido del solco perimplantare (PISF)

I campioni verranno prelevati da due tasche perimplantari più profonde e da due tasche parodontali più profonde di pazienti con perimplantite. La contaminazione con la saliva verrà evitata isolando ciascuna area con rulli di cotone e disidratando leggermente con aria. La placca verrà rimossa delicatamente utilizzando una curette parodontale. Utilizzando il metodo dell'orifizio, i campioni saranno ottenuti entro 30 secondi con strisce di carta standardizzate (Periopaper; Oraflow Inc., Plainview, NY). I volumi verranno misurati su un dispositivo elettronico di misurazione del fluido gengivale precalibrato (Oraflow Inc., Plainview, NY). 40 Le letture del dispositivo elettronico verranno convertite in un volume effettivo (μl) facendo riferimento a una curva standard. Saranno esclusi i campioni contaminati con sangue o saliva. Tutte e sei le strisce di Periopaper verranno riunite in provette di plastica per microcentrifuga Eppendorf e conservate a -80 °C fino al trasferimento all'Istituto di Odontoiatria dell'Università di Berna, in ghiaccio secco per le analisi.

Analisi di laboratorio

I campioni di saliva e placca saranno trasferiti al Laboratorio di Microbiologia Orale, Dipartimento di Parodontologia, Scuola di Odontoiatria, Università di Berna e tutte le analisi di laboratorio saranno eseguite dal Dr. Aysegul Sari presso il Laboratorio di Microbiologia Orale, Dipartimento di Parodontologia, Scuola di Odontoiatria, Università di Berna, Svizzera dopo la firma dell'accordo di trasferimento del materiale.

Analisi biochimica

Lo stato di fumatore dei pazienti sarà determinato mediante analisi della cotinina utilizzando un kit di dosaggio immunoenzimatico nei campioni di saliva.

Analisi microbiologica

Nei campioni di placca verrà analizzata la presenza e l'abbondanza di Fusobacterium nucleatum, Campylobacter rectus, Prevotella intermedia, Aggregatinacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Saccharibacteria (TM7), Streptococcus aureus e Actinomyces oris. L'identificazione mirata di questi batteri sarà effettuata mediante Real Time Q-PCR. Il sequenziamento dell'RNA 16 verrà utilizzato per un'analisi microbiologica imparziale e non mirata. Verrà estratto il DNA genomico totale e quindi verrà eseguita l'amplificazione dell'rRNA 16S.

Analisi GCF

L'analisi GCF è prevista come secondo studio. Il test immunologico multiplex basato su sfere Luminex verrà utilizzato per eseguire l'analisi di campioni di GCF e saliva. I marcatori GCF e saliva sono stati ampiamente selezionati secondo la letteratura precedente come marcatori di stress ossidativo 8-OHdG, PARK7/DJ-1 e marcatori infiammatori della NADPH ossidasi IL-1beta, IL-17A/E, osteoprotegerina (OPG); marcatori di degradazione del tessuto connettivo MMP-8, MMP-3; marcatori di riparazione/rigenerazione proteina morfogenica ossea (BMP)-2, fattore di crescita epidermico (EGF) e fattore di crescita endoteliale vascolare (VEGF).

Analisi statistica

Poiché in letteratura non esiste uno studio simile, il calcolo del campione è stato effettuato sulla dimensione dell’effetto. La dimensione del campione necessaria era di 24 per ciascun gruppo per rilevare una differenza significativa con una dimensione dell'effetto (grande dimensione dell'effetto) di 0,4 e un livello di potenza del 90% con un livello di confidenza del 95% tra i quattro gruppi. Per i calcoli della dimensione del campione è stato utilizzato il pacchetto Gpower versione 3.1. La normalità delle variabili continue sarà valutata mediante il test di Shapiro-Wilk. Verranno utilizzati metodi statistici non parametrici per valori con distribuzione asimmetrica. Verrà eseguito il test di Kruskal-Wallis per confrontare più di due variabili non distribuite normalmente e il test di confronto multiplo di Dunn per analisi di confronto multiplo a coppie post hoc. Verrà eseguito un test ANOVA unidirezionale per confrontare più di due gruppi normalmente distribuiti e il test di Tukey verrà eseguito per analisi di confronto multiplo a coppie post hoc. Verranno eseguiti modelli lineari generali per determinare l'effetto della gravità del fumo sulla malattia perimplantare e parodontale.