Tupakoinnin vaikutus periimplantiittiin

Poikkileikkaustutkimus tehdään yhteistyössä Sveitsin Bernin yliopiston hammaslääketieteellisen tiedekunnan parodontologian laitosten, Hatay Mustafa Kemal -yliopiston, Dokuz Eylulin yliopiston, Gazin yliopiston ja Turkin Ege Universityn kanssa. Tutkimuksen ensimmäinen vaihe tehdään Turkissa ja toinen vaihe Sveitsissä. Koska Hatay on yksi kolmesta Turkin vuoden 2023 maanjäristyksen eniten kärsineestä maakunnasta ja Hatay Mustafa Kemalin yliopiston hammaslääkärikoulu vaurioitui pahoin, on mahdotonta saada näytteitä Hatayn potilaista. Siksi tämä projekti on suunniteltu monikeskukseksi, ja potilasnäytteitä rekrytoidaan Dokuz Eylülistä, Gazin yliopistosta ja Ege-yliopistosta, hammaslääketieteellisen tiedekunnan parodontologian laitoksesta. Näytteet analysoidaan Sveitsin Bernin yliopiston periodontologian laitoksen suun mikrobiologian laboratoriossa. Tutkimusprotokollan hyväksyi Dokuz Eylul -yliopiston ihmiskohteiden käytön eettinen komitea (protokollanro: 2023/GOA-8246).

Tähän tutkimukseen osallistuu 96 potilasta, jotka on jaettu neljään ryhmään:

• Tupakoitsijat, joilla on peri-implantiitti
• Tupakoimattomat henkilöt, joilla on periimplantiitti
• Tupakoitsijat, joilla on terveet implanttikudokset
• Tupakoimattomat henkilöt, joilla on terveet implanttikudokset

Tupakointi jaetaan kahteen ryhmään: tupakoitsija ja tupakoimaton (ei koskaan tupakoi). Tupakoimattomien ryhmään kuuluvat entiset tupakoitsijat, jotka lopettivat tupakoinnin vähintään 6 vuotta sitten.

Lasketaan päivässä poltetut savukkeet, tupakointiindeksi (itse ilmoittama keskimääräinen savuke päivässä x tupakan käyttövuodet) ja tupakointitaskuvuosi (itse ilmoittama keskimääräinen savuke päivässä x tupakan käyttövuodet / savukkeiden lukumäärä tasku). Tupakointitila havaitaan itseraportin mukaan. Tupakointitila vahvistetaan myöhemmin syljen kotiniinitasoilla. Syljen kotiniinipitoisuudeksi tupakointia varten hyväksytään 5-7 ng/ml. Tupakoinnin vakavuus määräytyy suuremmilla pitoisuuksilla.

Parodontaaliparametrit Kliiniset periodontaalimittaukset arvioidaan käyttämällä seuraavaa parodontaalidiagnoosissa. Mittaukset suoritetaan Williamsin periodontaalikoettimella (Hu-Friedy, Chicago, IL, USA), ja ne sisältävät mittaustaskun syvyyden (PPD), kliinisen kiinnittymistason (CAL), plakkiindeksin (PI) 26, ienindeksin (GI) 27, ja prosentuaalinen verenvuoto koetuksella (BOP) 28 kuudessa kohdassa hammasta kohden (mesio-bukkaalinen, bukkaalinen, disto-bukkaalinen, mesio-lingvaalinen, lingvaalinen ja disto-linguaalinen) jokaisessa hampaassa.

Parodontaalien sairauksien ja tilojen diagnoosi tehdään vuoden 2017 World Workshop on Classification of parodontaali- ja peri-implanttitautien ja -tilojen ehdottamien radiografisten ja kliinisten diagnostisten kriteerien mukaisesti.29 Peri-implantaattien terveyttä arvioidaan sen perusteella, ettei potilaalla ole visuaalisia merkkejä. tulehdus, verenvuoto koettaessa ja luun menetys alkuperäisen paranemisen jälkeen, jonka ei pitäisi olla ≥2 mm. Perimplantiittipotilaiden kriteerit ovat PPD≥6 mm yhdessä runsaan verenvuodon ja ≥3 mm:n luukadon kanssa.

Potilaiden demografiset tiedot ja kliininen parodontaalinen/peri-implanttitutkimus

Seuraavat muuttujat kerätään:

• Sukupuoli
• Ikä
• BMI
• Implanttien ikä
• Implanttien lukumäärä ja sijainti
• Kirurgisen vaiheen vaiheet
• Implanttihoitoon liittyvät komplikaatiot
• Implantin väärä asento
• Implanttien liikkuvuus ja epämukavuus (erot Periotest-arvoissa - PTV:t)
• Aika implanttien lataamisesta nykyiseen tutkimukseen (aika toiminnassa)
• Korjaava muotoilu
• Proteesin kiinnitys
• Radiografinen luun taso
• Luuvaurion tyyppi ja koko
• Keratinisoituneen limakalvon esiintyminen
• Hampaiden harjauksen tiheys
• Interproksimaalinen hammaslanka/harjaus
• Hammaslääkärikäyntien tiheys
• Parodontiitin historia
• Syy hampaiden menetykseen
• Alkoholin käyttö

Kokoelma sylkeä

Sylkinäytteet otetaan potilailta stimuloimattomina. Näytteet otetaan yli 10 minuutin kuluessa, kun osallistujat istuvat. Näytteitä säilytetään -80°C:ssa, kunnes ne siirretään Bernin yliopiston hammaslääketieteen korkeakoulun parodontologian osastolle kuivajäässä analysointia varten.

Plakkinäytteiden kokoelma

Plakkinäytteet otetaan periimplantitiitin ja periodontiitin subgingivaalisesta alueesta periimplantitiittiryhmässä sekä parodontaalin terveeltä ja peri-implanttiterveyden subgingivaalliselta alueelta periimplantaattien terveysryhmissä. Subgingivaaliset implantit ja plakkinäytteet otetaan kahdesta syvimmästä parodontaalitaskusta ja implanttitaskusta 200 µl RNAlaterista Eppendorf-putkissa. Näytteenottopaikat eristetään syljestä ja kuivataan hieman ilmassa. Näyte kerätään käyttämällä steriiliä Gracey-kyrettiä (HuFriedy, Rotterdam, Alankomaat). Näytteet otetaan periimplanttiterveysalueelta samalla menetelmällä periimplanttiterveysryhmässä. Eppendorf-mikrosentrifugiputket säilytetään -80 °C:ssa, kunnes ne siirretään Bernin yliopiston Hammaslääketieteen instituuttiin kuivajäässä analyyseja varten.

Gingival Crevicular Fluid (GCF) ja peri-implant Sulcus Fluid (PISF) näytteiden kokoelma

Näytteet otetaan kahdesta syvimmästä implanttitaskusta ja kahdesta syvimmästä parodontaalitaskusta periimplantaattipotilailta. Syljen saastuminen vältetään eristämällä jokainen alue puuvillarullilla ja kuivaamalla hieman ilmalla. Plakki poistetaan varovasti parodontaalisen kyretin avulla. Käyttämällä aukkomenetelmää 39 näytteet saadaan 30 sekunnissa standardoiduilla paperiliuskoilla (Periopaper; Oraflow Inc., Plainview, NY). Tilavuudet mitataan esikalibroidulla elektronisella iennesteen mittauslaitteella (Oraflow Inc., Plainview, NY). 40 Elektronisen laitteen lukemat muunnetaan todelliseksi tilavuudeksi (μl) standardikäyrän avulla. Verellä tai syljellä saastuneita näytteitä ei oteta huomioon. Kaikki kuusi Periopaper-liuskaa yhdistetään muovisiin Eppendorf-mikrosentrifugiputkiin ja säilytetään -80 °C:ssa, kunnes ne siirretään Bernin yliopiston Hammaslääketieteen instituuttiin kuivajäässä analyyseja varten.

Laboratorioanalyysit

Sylki- ja plakkinäytteet siirretään Bernin yliopiston Hammaslääketieteen korkeakoulun Parodontologian laboratorioon ja kaikki laboratorioanalyysit suorittaa tohtori Aysegul Sari Suun mikrobiologian laboratoriossa, Parodontologian osasto, koulu Dental Medicine, Bernin yliopisto, Sveitsi materiaalinsiirtosopimuksen allekirjoittamisen jälkeen.

Biokemiallinen analyysi

Potilaiden tupakoinnin tila määritetään kotiniinianalyysillä käyttämällä entsyymi-immunomäärityssarjaa sylkinäytteissä.

Mikrobiologinen analyysi

Fusobacterium nucleatum, Campylobacter rectus, Prevotella intermedia, Aggregatinacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Saccharibacteria (TM7), Streptococcus aureus tai Actinoques analysoidaan näytteet ja niiden runsaus. Näiden bakteerien kohdennettu tunnistaminen tehdään Real Time Q-PCR:llä. 16sRNA-sekvensointia käytetään puolueettomaan ja kohdentamattomaan mikrobiologiseen analyysiin. Koko genominen DNA uutetaan, ja sitten suoritetaan 16S-rRNA:n monistus.

GCF-analyysi

GCF-analyysi on suunniteltu toiseksi tutkimukseksi. Luminex-helmipohjaista multipleksi-immunomääritystä käytetään GCF- ja sylkinäytteiden analyysiin. GCF- ja sylkimarkkerit valittiin laajasti aikaisemman kirjallisuuden mukaan oksidatiivisiksi stressimarkkereiksi 8-OHdG, PARK7/DJ-1 ja NADPH-oksidaasin tulehdusmarkkereiksi IL-1beta, IL-17A/E, osteoprotegeriini (OPG); sidekudoksen hajoamismarkkerit MMP-8, MMP-3; korjaus/regeneraatiomarkkerit luun morfogeeninen proteiini (BMP)-2, epidermaalinen kasvutekijä (EGF) ja verisuonten endoteelikasvutekijä (VEGF).

Tilastollinen analyysi

Koska kirjallisuudessa ei ole vastaavaa tutkimusta, otoslaskelma tehtiin vaikutuksen koosta. Tarvittava näytekoko oli 24 kullekin ryhmälle merkittävän eron havaitsemiseksi vaikutuskoolla (suuri vaikutuskoko) 0,4 ja tehotasolla 90 % 95 %:n luottamustasolla neljän ryhmän välillä. Otoskoon laskennassa käytettiin Gpower-paketin versiota 3.1. Jatkuvien muuttujien normaalius arvioidaan Shapiro-Wilkin testillä. Ei-parametriset tilastolliset menetelmät suoritetaan arvoille, joiden jakauma on vino. Kruskal-Wallis-testi suoritetaan vertaamaan enemmän kuin kahta ei-normaalijakautunutta muuttujaa ja Dunn-monivertailutesti post hoc -pari-monivertailuanalyyseihin. Yksisuuntainen ANOVA-testi suoritetaan vertaamaan useampaa kuin kahta normaalijakaumaa ryhmää, ja Tukey-testi suoritetaan post hoc parittaisten useiden vertailuanalyyseihin. Yleisillä lineaarisilla malleilla määritetään tupakoinnin vaikeusasteen vaikutus periimplantiin ja parodontaaliin.