Effekten av rökning på peri-implantit

Tvärsnittsstudien kommer att genomföras i samarbete med avdelningarna för parodontologi vid odontologiska fakulteten vid Bern University, Schweiz, Hatay Mustafa Kemal University, Dokuz Eylul University, Gazi University och Ege University, Turkiet. Det första steget av studien kommer att genomföras i Turkiet och det andra steget i Schweiz. Eftersom Hatay är en av de tre provinserna som drabbades hårdast av jordbävningen 2023 i Turkiet och Hatay Mustafa Kemal University Dental School blev allvarligt skadad, är det omöjligt att rekrytera prover från patienterna i Hatay. Därför har detta projekt planerats som ett multicenter, och patientprover kommer att rekryteras från Dokuz Eylül, Gazi University, och Ege University, Institutionen för parodontologi, Odontologiska fakulteten. Proverna kommer att analyseras i Laboratory of Oral Microbiology, Institutionen för parodontologi, University of Bern, Schweiz. Studieprotokollet godkändes av den etiska kommittén för användning av mänskliga subjekt i forskning vid Dokuz Eylul University (protokoll nr: 2023/GOA-8246).

Denna studie kommer att omfatta 96 patienter, lika uppdelade i fyra grupper:

• Rökare med peri-implantit
• Icke-rökare med periimplantit
• Rökare med friska peri-implantatvävnader
• Icke-rökare med friska peri-implantatvävnader

Rökningsstatus kommer att kategoriseras i två grupper: rökare och icke-rökare (rökar aldrig). Den icke-rökare gruppen kommer att omfatta före detta rökare som slutade röka för minst 6 år sedan.

Cigaretterna rökta per dag, rökindex (självrapporterade genomsnittliga cigaretter per dag x år av tobaksanvändning) och rökficka år kommer att beräknas (självrapporterade genomsnittliga cigaretter per dag x år av tobaksanvändning / antalet cigaretter i en ficka). Rökningsstatus kommer att upptäckas enligt självrapportering. Rökningsstatus kommer senare att valideras av salivkotininnivåer. Salivkotininkoncentration för rökning accepteras vid 5-7 ng/ml. Svårighetsgraden av rökningen avgörs av högre koncentrationer.

Parodontala parametrar Kliniska parodontala mätningar kommer att bedömas med hjälp av följande för parodontal diagnos. Mätningarna kommer att utföras med en Williams parodontala sond (Hu-Friedy, Chicago, IL, USA) och inkluderar sonderingsfickadjup (PPD), klinisk anknytningsnivå (CAL), plackindex (PI) 26, gingivalindex (GI) 27, och procentuell blödning vid sondering (BOP) 28 vid sex ställen per tand (mesio-buckal, buckal, disto-buckal, mesio-lingual, lingual och disto-lingual) på varje tand.

Diagnos av parodontala sjukdomar och tillstånd kommer att göras enligt de röntgenologiska och kliniska diagnostiska kriterierna som föreslås av 2017 års World Workshop on Classification of Periodontal and Peri-implant Diseases and Conditions.29 Peri-implantatets hälsa kommer att bedömas genom frånvaron av visuella tecken på parodontala sjukdomar och tillstånd. inflammation, blödning vid sondering och ytterligare benförlust efter initial läkning, som inte bör vara ≥2 mm. Kriterierna för patienter med periimplantit kommer att vara PPD≥6 mm i samband med kraftig blödning och ≥3 mm benförlust.

Patientdemografi och klinisk parodontal/periimplantatundersökning

Följande variabler kommer att samlas in:

• Kön
• Ålder
• BMI
• Implantatets ålder
• Antal och placering av implantat
• Kirurgiska fassteg
• Komplikationer relaterade till implantatbehandling
• Felplacering av implantatet
• Implantatrörlighet och obehag (skillnader i Periotest-värden-PTV)
• Tid från laddning av implantat till aktuell undersökning (tid i funktion)
• Återställande design
• Protesretention
• Radiografisk bennivå
• Typ och storlek av bendefekt
• Förekomst av keratiniserad slemhinna
• Frekvens av tandborstning
• Interproximal tandtråd/borstning
• Frekvens av tandläkarbesök
• Historia av parodontit
• Orsak till tandlossning
• Användning av alkohol

Samling av saliv

Salivprover kommer att tas från patienter som ostimulerade. Prover kommer att erhållas under 10 minuter när deltagarna kommer att sitta. Proverna kommer att förvaras vid -80°C tills de överförs till Institutionen för parodontologi, School of Dental Medicine, University of Bern, i torris för analyserna.

Samling av plackprover

Plackprover kommer att tas från periimplantit och parodontit subgingivalområdet i periimplantitgruppen, och det parodontala friska och periimplantata hälsosubgingivalområdet i periimplantathälsogrupperna. Subgingivala implantat- och tandplackprover kommer att samlas in från de två djupaste parodontala fickorna och peri-implantatfickorna inom 200 μl RNAlater i Eppendorf-rör. Provtagningsplatserna kommer att isoleras från saliv och lufttorkas något. Provet kommer att samlas in med en steril Gracey-kyrett (HuFriedy, Rotterdam, Nederländerna). Proverna kommer att tas från hälsoområdet periimplantat med samma metod i hälsogruppen periimplantat. Eppendorf-mikrocentrifugrör kommer att förvaras vid -80 °C tills de överförs till Institute of Dentistry, Bern University, i torris för analyserna.

Samling av Gingival Crevicular Fluid (GCF) och Peri-implant Sulcus Fluid (PISF) prover

Proverna kommer att tas från två djupaste peri-implantatfickor och två djupaste parodontala fickor från peri-implantitpatienter. Salivkontamination undviks genom att isolera varje område med bomullsrullar och torka något med luft. Plack avlägsnas försiktigt med en parodontala kyrett. Med hjälp av öppningsmetoden 39 kommer proverna att erhållas inom 30 sekunder med standardiserade pappersremsor (Periopaper; Oraflow Inc., Plainview, NY). Volymerna kommer att mätas på en förkalibrerad elektronisk tandköttsvätska-mätanordning (Oraflow Inc., Plainview, NY). 40 Avläsningarna från den elektroniska enheten kommer att omvandlas till en faktisk volym (μl) med hänvisning till en standardkurva. Prover kontaminerade med blod eller saliv kommer att uteslutas. Alla sex Periopaper-remsorna kommer att slås samman i Eppendorf-mikrocentrifugrör av plast och förvaras vid -80 °C tills de överförs till Institute of Dentistry, Bern University, i torris för analyserna.

Laboratorieanalyser

Saliv- och plackprover kommer att överföras till Laboratory of Oral Microbiology, Institutionen för parodontologi, School of Dental Medicine, University of Bern och alla laboratorieanalyser kommer att utföras av Dr Aysegul Sari vid Laboratory of Oral Microbiology, Institutionen för parodontologi, Skolan of Dental Medicine, University of Bern, Schweiz efter att materialöverföringsavtalet har undertecknats.

Biokemisk analys

Patienternas rökstatus kommer att bestämmas genom kotininanalys med hjälp av ett enzymimmunoanalyskit i salivproverna.

Mikrobiologisk analys

Förekomsten och förekomsten av Fusobacterium nucleatum, Campylobacter rectus, Prevotella intermedia, Aggregatinacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema dentcola, Saccharibacteria (TM7), Streptococcus aureus, och plaque-prover, testinomyces eller aktinomyces analyseras. Den riktade identifieringen av dessa bakterier kommer att göras av Real Time Q-PCR. 16sRNA-sekvensering kommer att användas för en opartisk och oriktad mikrobiologisk analys. Totalt genomiskt DNA kommer att extraheras och sedan kommer amplifiering av 16S rRNA att utföras.

GCF-analys

GCF-analys planeras som en andra studie. Luminex pärlor-baserad multiplex immunoanalys kommer att användas för att utföra analysen av GCF och salivprover. GCF- och salivmarkörer valdes brett enligt tidigare litteratur som oxidativ stressmarkörer 8-OHdG, PARK7/DJ-1 och NADPH-oxidasinflammatoriska markörer IL-1beta, IL-17A/E, osteoprotegerin (OPG); bindvävsnedbrytningsmarkörer MMP-8, MMP-3; reparations-/regenereringsmarkörer benmorfogent protein (BMP)-2, epidermal tillväxtfaktor (EGF) och vaskulär endotelial tillväxtfaktor (VEGF).

Statistisk analys

Eftersom det inte finns någon liknande studie i litteraturen gjordes urvalsberäkningen på effektstorleken. Den nödvändiga urvalsstorleken var 24 för varje grupp för att upptäcka en signifikant skillnad vid en effektstorlek (stor effektstorlek) på 0,4 och en effektnivå på 90 % med en 95 % konfidensnivå mellan de fyra grupperna. Gpower-paketversion 3.1 användes för beräkningar av urvalsstorlek. Normaliteten hos kontinuerliga variabler kommer att utvärderas med Shapiro-Wilks test. Icke-parametriska statistiska metoder kommer att utföras för värden med skev fördelning. Kruskal-Wallis test kommer att utföras för att jämföra mer än två icke-normalfördelade variabler, och Dunn multipel jämförelsetest för post hoc parvisa multipla jämförelseanalyser. Ett enkelriktat ANOVA-test kommer att utföras för att jämföra mer än två normalfördelade grupper, och Tukey-testet kommer att utföras för post hoc parvisa multipla jämförelseanalyser. Allmänna linjära modeller kommer att utföras för att bestämma effekten av svårighetsgraden av rökning på periimplantat och periodontal sjukdom.