El efecto del tabaquismo sobre la periimplantitis

El estudio transversal se llevará a cabo en colaboración con los Departamentos de Periodoncia de la Facultad de Odontología de la Universidad de Berna, Suiza, la Universidad Hatay Mustafa Kemal, la Universidad Dokuz Eylul, la Universidad Gazi y la Universidad Ege, Turquía. El primer paso del estudio se llevará a cabo en Turquía y el segundo en Suiza. Dado que Hatay es una de las tres provincias más afectadas por el terremoto de 2023 en Turquía y que la Facultad de Odontología de la Universidad Hatay Mustafa Kemal resultó gravemente dañada, es imposible recolectar muestras de los pacientes de Hatay. Por lo tanto, este proyecto se ha planificado como multicéntrico y se reclutarán muestras de pacientes de Dokuz Eylül, Universidad Gazi y Universidad Ege, Departamento de Periodoncia, Facultad de Odontología. Las muestras se analizarán en el Laboratorio de Microbiología Oral del Departamento de Periodoncia de la Universidad de Berna, Suiza. El protocolo del estudio fue aprobado por el Comité de Ética para el Uso de Sujetos Humanos en Investigación de la Universidad Dokuz Eylul (Protocolo No: 2023/GOA-8246).

Este estudio incluirá 96 pacientes, divididos igualmente en cuatro grupos:

• Fumadores con periimplantitis
• Personas no fumadoras con periimplantitis
• Fumadores con tejidos periimplantarios sanos
• Individuos no fumadores con tejidos periimplantarios sanos.

El tabaquismo se clasificará en dos grupos: fumador y no fumador (nunca fumador). El grupo de no fumadores incluirá a ex fumadores que dejaron de fumar hace al menos 6 años.

Se calcularán los cigarrillos fumados por día, el índice de tabaquismo (cigarrillos promedio autoinformados por día x años de consumo de tabaco) y el año de bolsillo de tabaquismo (cigarrillos promedio autoinformados por día x años de consumo de tabaco / el número de cigarrillos en un bolsillo). El estado de tabaquismo se detectará según el autoinforme. El estado de tabaquismo será validado posteriormente por los niveles de cotinina en la saliva. Se aceptará una concentración de cotinina salival para fumar de 5 a 7 ng/ml. La gravedad del tabaquismo estará determinada por concentraciones más altas.

Parámetros periodontales Las mediciones periodontales clínicas se evaluarán utilizando lo siguiente para el diagnóstico periodontal. Las mediciones se realizarán utilizando una sonda periodontal Williams (Hu-Friedy, Chicago, IL, EE. UU.) e incluirán la profundidad de la bolsa de sondaje (PPD), el nivel de inserción clínica (CAL), el índice de placa (PI) 26, el índice gingival (GI) 27, y porcentaje de sangrado al sondaje (BOP) 28 en seis sitios por diente (mesiovestibular, bucal, distovestibular, mesiolingual, lingual y distolingual) en cada diente.

El diagnóstico de enfermedades y afecciones periodontales se realizará de acuerdo con los criterios de diagnóstico clínico y radiográfico propuestos por el Taller Mundial sobre Clasificación de Enfermedades y Afecciones Periodontales y Periimplantarias de 2017.29 La salud periimplantaria se evaluará mediante la ausencia de signos visuales de inflamación, sangrado al sondaje y mayor pérdida ósea después de la curación inicial, que no debe ser ≥2 mm. Los criterios para pacientes con periimplantitis serán PPD ≥6 mm junto con sangrado profuso y pérdida ósea ≥3 mm.

Datos demográficos del paciente y examen clínico periodontal/periimplantario.

Se recogerán las siguientes variables:

• Género
• Edad
• IMC
• Edad del implante
• Número y ubicación de los implantes.
• Pasos de la fase quirúrgica
• Complicaciones relacionadas con el tratamiento con implantes.
• Malposición del implante
• Movilidad y malestar del implante (diferencias en los valores de Periotest-PTV)
• Tiempo desde la carga de los implantes hasta el examen actual (tiempo en función)
• Diseño restaurador
• Retención de prótesis
• Nivel óseo radiográfico
• Tipo y tamaño del defecto óseo.
• Presencia de mucosa queratinizada.
• Frecuencia del cepillado dental
• Uso de hilo dental/cepillado interproximal
• Frecuencia de cita dental
• Historia de periodontitis
• Razón de la pérdida de dientes
• uso de alcohol

Colección de saliva

Se obtendrán muestras de saliva de pacientes sin estimular. Las muestras se obtendrán durante 10 minutos cuando los participantes estén sentados. Las muestras se mantendrán a -80 °C hasta su transferencia al Departamento de Periodoncia de la Facultad de Medicina Dental de la Universidad de Berna, en hielo seco para los análisis.

Colección de muestras de placa

Se tomarán muestras de placa del área subgingival de periimplantitis y periodontitis en el grupo de periimplantitis, y del área subgingival de salud periodontal sana y periimplantaria en los grupos de salud periimplantaria. Se recolectarán muestras de placa dental y implantes subgingivales de las dos bolsas periodontales más profundas y bolsas periimplantarias dentro de 200 μl de RNAlater en tubos Eppendorf. Los sitios de muestreo se aislarán de la saliva y se secarán ligeramente al aire. La muestra se recolectará utilizando una cureta Gracey estéril (HuFriedy, Rotterdam, Países Bajos). Las muestras se tomarán del área de salud periimplantaria por el mismo método en el grupo de salud periimplantaria. Los tubos de microcentrífuga Eppendorf se almacenarán a -80 °C hasta su transferencia al Instituto de Odontología de la Universidad de Berna, en hielo seco para los análisis.

Recolección de muestras de líquido crevicular gingival (GCF) y líquido del surco periimplantario (PISF)

Las muestras se tomarán de dos bolsas periimplantarias más profundas y dos bolsas periodontales más profundas de pacientes con periimplantitis. Se evitará la contaminación de la saliva aislando cada zona con rollos de algodón y deshidratando ligeramente con aire. La placa se eliminará suavemente utilizando una cureta periodontal. Utilizando el método del orificio, 39 las muestras se obtendrán en 30 segundos con tiras de papel estandarizadas (Periopaper; Oraflow Inc., Plainview, NY). Los volúmenes se medirán en un dispositivo electrónico de medición del líquido gingival precalibrado (Oraflow Inc., Plainview, NY). 40 Las lecturas del dispositivo electrónico se convertirán a un volumen real (μl) con referencia a una curva estándar. Se excluirán las muestras contaminadas con sangre o saliva. Las seis tiras de Periopaper se combinarán en tubos de microcentrífuga Eppendorf de plástico y se almacenarán a -80 °C hasta su transferencia al Instituto de Odontología de la Universidad de Berna, en hielo seco para los análisis.

Análisis de laboratorio

Las muestras de saliva y placa se transferirán al Laboratorio de Microbiología Oral, Departamento de Periodoncia, Facultad de Medicina Dental, Universidad de Berna y todos los análisis de laboratorio serán realizados por el Dr. Aysegul Sari en el Laboratorio de Microbiología Oral, Departamento de Periodoncia, Escuela. de Medicina Dental, Universidad de Berna, Suiza, después de que se firme el acuerdo de transferencia de material.

Análisis bioquímico

El estado de tabaquismo de los pacientes se determinará mediante análisis de cotinina utilizando un kit de inmunoensayo enzimático en las muestras de saliva.

Análisis microbiológico

En muestras de placa se analizará la presencia y abundancia de Fusobacterium nucleatum, Campylobacter rectus, Prevotella intermedia, Aggregatinacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Saccharibacteria (TM7), Streptococcus aureus y Actinomyces oris. La identificación específica de estas bacterias se realizará mediante Q-PCR en tiempo real. La secuenciación de 16sRNA se utilizará para un análisis microbiológico imparcial y no dirigido. Se extraerá el ADN genómico total y luego se realizará la amplificación del ARNr 16S.

Análisis del FVC

El análisis del GCF está previsto como segundo estudio. Se utilizará un inmunoensayo multiplex basado en perlas Luminex para realizar el análisis de GCF y muestras de saliva. Los marcadores de GCF y saliva se seleccionaron ampliamente de acuerdo con la literatura previa como marcadores de estrés oxidativo 8-OHdG, PARK7/DJ-1 y marcadores inflamatorios de NADPH oxidasa IL-1beta, IL-17A/E, osteoprotegerina (OPG); marcadores de degradación del tejido conectivo MMP-8, MMP-3; marcadores de reparación/regeneración proteína morfogénica ósea (BMP)-2, factor de crecimiento epidérmico (EGF) y factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF).

Análisis estadístico

Dado que no existe un estudio similar en la literatura, el cálculo de la muestra se realizó sobre el tamaño del efecto. El tamaño de muestra necesario fue 24 para cada grupo para detectar una diferencia significativa con un tamaño del efecto (tamaño del efecto grande) de 0,4 y un nivel de poder del 90% con un nivel de confianza del 95% entre los cuatro grupos. Se utilizó el paquete Gpower versión 3.1 para los cálculos del tamaño de la muestra. La normalidad de las variables continuas será evaluada mediante la prueba de Shapiro-Wilk. Se realizarán métodos estadísticos no paramétricos para valores con distribución asimétrica. Se realizará la prueba de Kruskal-Wallis para comparar más de dos variables no distribuidas normalmente y la prueba de comparación múltiple de Dunn para análisis de comparación múltiple post hoc por pares. Se realizará una prueba ANOVA unidireccional para comparar más de dos grupos normalmente distribuidos, y se realizará la prueba de Tukey para análisis de comparación múltiple por pares post hoc. Se realizarán modelos lineales generales para determinar el efecto de la gravedad del tabaquismo en la enfermedad periimplantaria y periodontal.