牙种植体早期和延迟加载唾液中 CTXI 水平表达的研究

该研究将招募 40 名前来陶氏国际牙科学院 OPD 进行下颌后牙（磨牙区）种植体植入的患者。

陶氏国际牙科学院 (DIDC) 门诊部 (OPD) 提供的种植牙将被植入患者体内。 牙种植体将根据 Shaheen Ahmed 博士的标准方案进行植入。

患者将被分为两组。 A组患者进行早期负重，B组患者进行常规假体负重。

每位患者将在手术后、1 个月、2 个月和 3 个月时借助 Periotest 评估种植体稳定性。

在植入植入物之前以及手术后进行 Periotest 评估的同一天，将从两组患者中收集唾液。 唾液将被处理并立即储存在-80oC。 稍后将进行夹心 ELISA 以进行 CTX 的表达分析。

本研究以种植手术前的CTX水平作为参考值。

2.9.1唾液采集方法：

将从两个研究组收集完整的未刺激唾液（WUS）。 唾液采集过程如下：

• 唾液样本将在上午 9 点至 11 点之间采集，以尽量减少唾液流量的昼夜变化和唾液化学的变化。
• 要求患者在唾液采集前至少一小时避免吸烟、饮酒和咀嚼，以避免水和食物干扰分析。
• 为了清除口腔中的食物残渣，患者将被要求在收集唾液之前用水清洗口腔。
• 彻底冲洗后，至少间隔10分钟再采集唾液样本，以避免样本稀释。
• 患者将被要求将唾液吐到15毫升的无菌猎鹰管中。
• 将从每位患者身上收集大约 2-5 mL 唾液。
• 将告知患者不要咳出粘液。
• 唾液采集后，样本将立即送往实验室进行进一步处理。
• 唾液样本将在 4°C 下以 8000rpm 离心 15 分钟，以去除任何细胞碎片，并收集上清液。
• 收集的上清液将被分装到1ml的微量管中并储存在-80°C直至进一步分析（唾液的处理时间将尽可能保持在最短）。

2.9.2 唾液分析：

酶联免疫吸附测定（三明治技术）：

采用夹心ELISA（酶联免疫吸附测定）技术分析所有组唾液样本中的CTX水平。 将根据制造商的说明使用 CTX 试剂盒进行 ELISA 测试。 试剂盒中将提供预先包被有人类 CTX 特异性抗体的板。 将标准品或样品添加到微型 ELISA 板孔中，使 CTX 与其特异性抗体结合。 去除未结合的样品后，添加生物素化的CTX检测抗体，然后用缓冲液洗涤。 清洗后，将板与链霉亲和素-辣根过氧化物酶 (HRP) 一起孵育，该酶将与检测抗体结合。 孵育后，未结合的链霉亲和素-HRP 将被洗掉。 最后，添加底物溶液。 显色强度与样品中存在的人 CTX 量成正比。 通过添加终止溶液来终止反应，并在 450 nm 波长处通过分光光度法测量吸光度。 通过将样品的吸光度与标准品进行比较来获得样品中 CTX 的浓度。

ELISA 将由该研究的主要研究者在 DRIBBS（陶氏生物技术与生物医学科学研究所）的联合导师的帮助下进行。