ENQUÊTE SUR L'EXPRESSION DES NIVEAUX DE CTXI DANS LA SALIVE AVEC CHARGEMENT PRÉCOCE ET RETARDÉ D'IMPLANTS DENTAIRES

40 patients venant à l'OPD du Dow International Dental College pour la pose d'implants dans la mandibule postérieure (zone molaire) seront recrutés dans l'étude.

Des implants dentaires disponibles dans le service ambulatoire (OPD) du Dow International Dental College (DIDC) seront placés chez les patients. Les implants dentaires seront posés selon les protocoles standards par le Dr Shaheen Ahmed.

Les patients seront divisés en deux groupes. Les patients du groupe A seront chargés précocement et le groupe B sera chargé de manière conventionnelle avec une prothèse.

Chaque patient sera évalué pour la stabilité de l'implant après la chirurgie, à 1 mois, 2 mois et 3 mois à l'aide du Periotest.

La salive sera collectée auprès des patients des deux groupes avant la pose de l'implant et les mêmes jours que les évaluations Periotest après la chirurgie. La salive sera traitée et immédiatement stockée à -80 °C. Un ELISA sandwich ultérieur sera effectué pour l'analyse expressionnelle du CTX.

Les niveaux de CTX avant la chirurgie implantaire serviront de valeur de référence dans cette étude.

2.9.1 Méthode de collecte de salive :

De la salive entière non stimulée (WUS) sera collectée auprès des deux groupes d'étude. Le processus de collecte de salive est le suivant :

• Des échantillons salivaires seront collectés entre 9h et 11h pour minimiser les variations diurnes du flux salivaire et les changements dans la chimie du sialo.
• Il sera demandé aux patients de s'abstenir de fumer, de boire et de mâcher au moins une heure avant le prélèvement de salive pour éviter toute interférence de l'eau et de la nourriture avec l'analyse.
• Pour éliminer tout débris alimentaire de la bouche, il sera demandé aux patients de se laver la bouche avec de l'eau avant le prélèvement de salive.
• Après un rinçage abondamment, un intervalle d'au moins 10 minutes sera accordé avant le prélèvement des échantillons de salive afin d'éviter toute dilution des échantillons.
• Il sera demandé aux patients de cracher la salive dans un tube Falcon stérilisé de 15 ml.
• Environ 2 à 5 ml de salive seront collectés sur chaque patient.
• Le patient sera informé et invité à ne pas cracher de mucus.
• Après le prélèvement de salive, les échantillons seront immédiatement transportés au laboratoire pour un traitement ultérieur.
• Les échantillons salivaires seront centrifugés à 8 000 tr/min pendant 15 min à 4 °C pour éliminer tout débris cellulaire et le surnageant sera collecté.
• Le surnageant collecté sera aliquoté dans des microtubes de 1 ml et sera conservé à -80°C jusqu'à une analyse plus approfondie (le temps de traitement de la salive sera maintenu le plus bas possible).

2.9.2 Analyse salivaire :

Test immuno-enzymatique (technique sandwich) :

Les niveaux de CTX dans les échantillons salivaires de tous les groupes seront analysés par la technique sandwich ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay). Les tests ELISA seront effectués à l'aide du kit CTX conformément aux instructions du fabricant. La plaque pré-enduite d'anticorps spécifique du Human CTX sera fournie avec le kit. Des standards ou des échantillons sont ajoutés aux puits de la plaque micro ELISA, ce qui permet au CTX de se lier à son anticorps spécifique. Après avoir retiré l'échantillon non lié, un anticorps de détection CTX biotinylé sera ajouté, suivi d'un lavage avec le tampon. Après le lavage, la plaque sera incubée avec de la streptavidine-peroxydase de raifort (HRP) qui se liera à l'anticorps de détection. Après l'incubation, la streptavidine-HRP non liée sera éliminée. Enfin, une solution de substrat sera ajoutée. L'intensité de la couleur développée est proportionnelle à la quantité de CTX humaine présente dans l'échantillon. La réaction sera arrêtée par l'ajout d'une solution d'arrêt et l'absorbance sera mesurée spectrophotométriquement à une longueur d'onde de 450 nm. La concentration de CTX dans les échantillons est obtenue en comparant l'absorbance des échantillons aux standards.

ELISA sera réalisée par la chercheuse principale de l'étude avec l'aide de son co-superviseur au DRIBBS (Dow Research Institute of Biotechnology and Biomedical Sciences).