A CTXI-SZINT NYÁLBAN KIFEJEZÉSÉNEK VIZSGÁLATA FOGIMPLANTÁTUMOK KORAI és KÉSLELTETETT BETÖLTÉSÉVEL

40 olyan beteget vonnak be a vizsgálatba, akik a Dow International Dental College OPD-jére érkeznek implantátum beültetés céljából a mandibula hátsó részébe (moláris terület).

A Dow International Dental College (DIDC) Ambuláns Osztályán (OPD) elérhető fogászati ​​implantátumokat helyezik be a betegekbe. A fogászati ​​implantátumokat a szabványos protokollok szerint Dr. Shaheen Ahmed fogja behelyezni.

A betegeket két csoportra osztják. Az A csoportos betegek korai terhelést kapnak, a B csoportba pedig a hagyományos protéziseket.

Periotest segítségével minden páciensnél megvizsgálják az implantátum stabilitását a műtét után, 1 hónapos, 2 hónapos és 3 hónapos korban.

Mindkét csoport betegeitől nyálat gyűjtenek az implantátum beültetése előtt, és ugyanazokon a napokon, mint a műtét utáni Periotest kiértékelésekor. A nyálat feldolgozzák és azonnal -80 oC-on tárolják. Később szendvics ELISA-t végeznek a CTX expressziós elemzéséhez.

Az implantációs műtét előtti CTX-szint referenciaértékként szolgál ebben a vizsgálatban.

2.9.1 Nyálgyűjtési módszer:

A teljes nem stimulált nyálat (WUS) mindkét vizsgálati csoportból összegyűjtik. A nyálgyűjtés folyamata a következő:

• A nyálmintákat 9-11 óra között gyűjtik, hogy minimalizálják a nyáláramlás napi ingadozásait és a sialo kémiájában bekövetkező változásokat.
• A betegeket arra kérik, hogy legalább egy órával a nyálgyűjtés előtt tartózkodjanak a dohányzástól, ivástól és rágástól, hogy elkerüljék a víz és az élelmiszerek beavatkozását az elemzés során.
• Az ételmaradékok szájából való eltávolítása érdekében a betegeket meg kell kérni, hogy a nyálgyűjtés előtt öblítsék ki a szájukat vízzel.
• Az alapos öblítés után legalább 10 perces szünetet kell tartani a nyálminták gyűjtése előtt, hogy elkerülje a minta hígulását.
• A betegeket arra kérik, hogy köpjék ki a nyálat egy 15 ml-es sterilizált sólyomcsőbe.
• Körülbelül 2-5 ml nyálat kell gyűjteni minden betegtől.
• A pácienst tájékoztatják, és felszólítják, hogy ne köhögjön fel nyálkát.
• A nyálgyűjtés után a mintákat azonnal a laboratóriumba viszik további feldolgozásra.
• A nyálmintákat 8000 fordulat/perc sebességgel centrifugáljuk 15 percig 4 °C-on, hogy eltávolítsuk a sejttörmeléket, és a felülúszót összegyűjtjük.
• Az összegyűjtött felülúszót 1 ml-es mikrocsövekbe osztják, és -80 °C-on tárolják a további elemzésig (a nyál feldolgozási idejét a lehető legalacsonyabbra kell csökkenteni).

2.9.2 Nyálanalízis:

Enzimhez kötött immunszorbens vizsgálat (szendvics technika):

Az összes csoport nyálmintájában a CTX-szinteket szendvics ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) technikával elemezzük. Az ELISA-tesztet CTX készlettel kell elvégezni a gyártó utasításai szerint. A Humán CTX-re specifikus antitesttel előzetesen bevont lemezt a készlettel együtt szállítjuk. Standardokat vagy mintákat adnak a mikro ELISA lemez üregeihez, ami lehetővé teszi, hogy a CTX kötődjön a specifikus antitestéhez. A kötetlen minta eltávolítása után biotinilált CTX-detektáló antitestet adunk hozzá, majd pufferrel mossuk. Mosás után a lemezt sztreptavidin-torma-peroxidázzal (HRP) inkubáljuk, amely a detektáló antitesthez kötődik. Inkubálás után a meg nem kötött Streptavidin-HRP lemosódik. Végül szubsztrát oldatot adunk hozzá. A kialakult szín intenzitása arányos a mintában jelenlévő humán CTX mennyiségével. A reakciót leállító oldat hozzáadásával leállítjuk, és az abszorbanciát spektrofotometriásan mérjük 450 nm hullámhosszon. A mintákban a CTX-koncentrációt a minták abszorbanciájának a standardokhoz viszonyított összehasonlításával kapjuk meg.

Az ELISA-t a vizsgálat vezető kutatója fogja elvégezni a DRIBBS (Dow Biotechnológiai és Orvosbiológiai Tudományok Kutatóintézete) társ-felügyelője segítségével.