INDAGINE DELL'ESPRESSIONE DEI LIVELLI CTXI NELLA SALIVA CON CARICO ANTICIPATO e RITARDATO degli IMPIANTI DENTALI

Nello studio verranno reclutati 40 pazienti che si rivolgeranno all'OPD del Dow International Dental College per il posizionamento di impianti nella mandibola posteriore (area molare).

Gli impianti dentali disponibili presso il reparto ambulatoriale (OPD) del Dow International Dental College (DIDC) verranno inseriti nei pazienti. Gli impianti dentali verranno posizionati secondo i protocolli standard dal Dr. Shaheen Ahmed.

I pazienti saranno divisi in due gruppi. I pazienti del gruppo A verranno caricati precocemente e il gruppo B verrà caricato in modo convenzionale con protesi.

Ogni paziente verrà valutato per la stabilità dell'impianto dopo l'intervento chirurgico, a 1 mese, 2 mesi e 3 mesi con l'aiuto di Periotest.

La saliva verrà raccolta dai pazienti di entrambi i gruppi prima del posizionamento dell'impianto e negli stessi giorni delle valutazioni Periotest dopo l'intervento chirurgico. La saliva verrà elaborata e immediatamente conservata a -80°C. Successivamente verrà effettuato un test ELISA sandwich per l'analisi espressiva delle CTX.

I livelli di CTX prima dell'intervento chirurgico implantare verranno utilizzati come valore di riferimento in questo studio.

2.9.1 Metodo di raccolta della saliva:

La saliva intera non stimolata (WUS) sarà raccolta da entrambi i gruppi di studio. Il processo di raccolta della saliva è il seguente:

• I campioni salivari verranno raccolti tra le 9 e le 11 per ridurre al minimo le variazioni diurne nel flusso salivare e i cambiamenti nella chimica del sialo.
• Ai pazienti verrà chiesto di astenersi dal fumare, bere e masticare almeno un'ora prima della raccolta della saliva per evitare interferenze di acqua e cibo con l'analisi.
• Per rimuovere eventuali residui di cibo dalla bocca, ai pazienti verrà chiesto di lavare la bocca con acqua prima della raccolta della saliva.
• Dopo aver risciacquato accuratamente, verrà concesso un intervallo di almeno 10 minuti prima della raccolta dei campioni di saliva per evitare la diluizione del campione.
• Ai pazienti verrà chiesto di sputare la saliva in una provetta Falcon sterilizzata da 15 ml.
• Da ciascun paziente verranno raccolti circa 2-5 ml di saliva.
• Il paziente verrà informato e gli verrà detto di non tossire muco.
• Dopo la raccolta della saliva, i campioni verranno immediatamente portati al laboratorio per ulteriori elaborazioni.
• I campioni salivari verranno centrifugati a 8000 giri/min per 15 minuti a 4°C per rimuovere eventuali detriti cellulari e verrà raccolto il surnatante.
• Il surnatante raccolto verrà suddiviso in microprovette da 1 ml e verrà conservato a -80°C fino a ulteriori analisi (il tempo di processazione della saliva sarà mantenuto il più basso possibile).

2.9.2 Analisi salivare:

Saggio immunoassorbente legato a un enzima (tecnica sandwich):

I livelli di CTX nei campioni salivari di tutti i gruppi saranno analizzati mediante la tecnica sandwich ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay). Il test ELISA verrà eseguito utilizzando il kit CTX secondo le istruzioni del produttore. Con il kit verrà fornita la piastra pre-rivestita con anticorpo specifico per la CTX umana. Gli standard o i campioni vengono aggiunti ai pozzetti della piastra micro ELISA che consentono al CTX di legarsi al suo anticorpo specifico. Dopo aver rimosso il campione non legato, verrà aggiunto l'anticorpo di rilevamento CTX biotinilato seguito dal lavaggio con il tampone. Dopo il lavaggio, la piastra verrà incubata con streptavidina-perossidasi di rafano (HRP) che si legherà all'anticorpo di rilevamento. Dopo l'incubazione, la Streptavidina-HRP non legata verrà eliminata mediante lavaggio. Infine verrà aggiunta la soluzione substrato. L'intensità del colore sviluppato è proporzionale alla quantità di CTX umana presente nel campione. La reazione verrà fermata mediante l'aggiunta della soluzione bloccante e l'assorbanza sarà misurata spettrofotometricamente alla lunghezza d'onda di 450 nm. La concentrazione di CTX nei campioni si ottiene confrontando l'assorbanza dei campioni con gli standard.

L'ELISA sarà eseguita dal ricercatore principale dello studio con l'aiuto del suo co-supervisore presso DRIBBS (Dow Research Institute of Biotechnology and Biomedical Sciences).