UNDERSÖKNING av UTTRYCK AV CTXI-NIVÅER I SALIVA MED TIDIGT och FÖRDRÖJD LADNING AV DENTALIMPLANTAT

40 patienter som kommer till OPD vid Dow International Dental College för implantatplacering i bakre underkäken (molarområdet) kommer att rekryteras i studien.

Tandimplantat som finns på poliklinisk avdelning (OPD) vid Dow International Dental College (DIDC) kommer att placeras i patienter. Tandimplantat kommer att placeras enligt standardprotokollen av Dr. Shaheen Ahmed.

Patienterna kommer att delas in i två grupper. Patienter i grupp A kommer att laddas tidigt, och grupp B kommer att vara konventionellt laddade med proteser.

Varje patient kommer att utvärderas för implantatstabilitet efter operationen, vid 1 månad, 2 månader och 3 månader med hjälp av Periotest.

Saliv kommer att samlas in från patienter i båda grupperna före placering av implantatet och på samma dagar som Periotest-utvärderingarna efter operationen. Saliv kommer att behandlas och omedelbart lagras vid -80oC. Senare sandwich ELISA kommer att utföras för expressionsanalys av CTX.

Nivåer av CTX före implantatkirurgi kommer att tjäna som referensvärde i denna studie.

2.9.1 Salivuppsamlingsmetod:

Hel ostimulerad saliv (WUS) kommer att samlas in från båda studiegrupperna. Processen för salivinsamling är som följer:

• Salivprover kommer att samlas in mellan kl. 9-11 för att minimera dygnsvariationer i salivflödet och förändringar i sialokemin.
• Patienterna kommer att uppmanas att avstå från att röka, dricka och tugga minst en timme före salivuppsamling för att undvika att vatten och mat stör analysen.
• För att ta bort eventuellt matrester från munnen kommer patienterna att bli ombedda att tvätta munnen med vatten innan saliv samlas upp.
• Efter noggrann sköljning kommer ett intervall på minst 10 minuter att ges före insamling av salivprover för att undvika provspädning.
• Patienterna kommer att uppmanas att spotta saliven i ett steriliserat falkrör på 15 ml.
• Cirka 2-5 ml saliv kommer att samlas in från varje patient.
• Patienten kommer att informeras och uppmanas att inte hosta upp slem.
• Efter salivuppsamling kommer prover omedelbart att tas till laboratoriet för vidare bearbetning.
• Salivprover kommer att centrifugeras vid 8000 rpm i 15 minuter vid 4˚C för att avlägsna eventuellt cellskräp och supernatanten kommer att samlas upp.
• Den uppsamlade supernatanten kommer att alikvoteras i mikrorör på 1 ml och kommer att förvaras vid -80°C tills vidare analys (bearbetningstiden för saliv kommer att hållas så låg som möjligt).

2.9.2 Salivanalys:

Enzymkopplad immunosorbentanalys (sandwichteknik):

CTX-nivåer i salivprover från alla grupper kommer att analyseras med sandwich-ELISA-teknik (Enzyme Linked Immunosorbent Assay). ELISA-testning kommer att utföras med CTX-kit enligt tillverkarens instruktioner. Plattan som är förbelagd med antikropp specifik mot Human CTX kommer att levereras med kitet. Standarder eller prover läggs till mikro ELISA-plattans brunnar som gör att CTX kan binda till dess specifika antikropp. Efter avlägsnande av obundet prov tillsätts biotinylerad CTX-detektionsantikropp följt av tvättning med bufferten. Efter tvätt kommer plattan att inkuberas med Streptavidin-pepparrotsperoxidas (HRP) som binder till detektionsantikroppar. Efter inkubation kommer obundet Streptavidin-HRP att tvättas bort. Slutligen tillsätts substratlösning. Intensiteten av färg som utvecklas är proportionell mot mängden humant CTX som finns i provet. Reaktionen kommer att stoppas genom tillsats av stopplösning och absorbansen kommer att mätas spektrofotometriskt vid 450 nm våglängd. Koncentrationen av CTX i prover erhålls genom att jämföra absorbansen hos proverna med standarderna.

ELISA kommer att utföras av studiens huvudutredare med hjälp av hennes medhandledare i DRIBBS (Dow Research Institute of Biotechnology and Biomedical Sciences).