BADANIE WYRAŻENIA POZIOMU ​​CTXI W ŚLINIE PRZY WCZESNYM I OPÓŹNIONYM OBCIĄŻENIU IMPLANTÓW STOMATOLOGICZNYCH

Do badania zostanie włączonych 40 pacjentów zgłaszających się do OPD Dow International Dental College w celu wszczepienia implantu w tylnej części żuchwy (w okolicy zębów trzonowych).

Implanty dentystyczne dostępne w Oddziale Przychodni (OPD) Dow International Dental College (DIDC) zostaną wszczepione pacjentom. Implanty dentystyczne zostaną wszczepione zgodnie ze standardowymi protokołami przez dr Shaheen Ahmed.

Pacjenci zostaną podzieleni na dwie grupy. Pacjenci z grupy A zostaną wcześnie obciążeni, a grupa B będzie obciążona konwencjonalnie protezą.

Każdy pacjent zostanie poddany ocenie stabilności implantu po operacji, po 1 miesiącu, 2 miesiącach i 3 miesiącach za pomocą Periotestu.

Od pacjentów w obu grupach pobierana będzie ślina przed wszczepieniem implantu oraz w tych samych dniach, w których przeprowadzano ocenę Periotestem po zabiegu. Ślina zostanie przetworzona i natychmiast przechowywana w temperaturze -80oC. Później zostanie przeprowadzony kanapkowy test ELISA w celu analizy ekspresyjnej CTX.

Poziomy CTX przed operacją wszczepienia implantu będą służyć jako wartość referencyjna w tym badaniu.

2.9.1 Metoda pobierania śliny:

Od obu grup badawczych zostanie pobrana cała niestymulowana ślina (WUS). Proces pobierania śliny przebiega następująco:

• Próbki śliny będą pobierane w godzinach 9-11, aby zminimalizować dobowe wahania w przepływie śliny i zmiany w chemii sialo.
• Pacjenci zostaną poproszeni o powstrzymanie się od palenia, picia i żucia co najmniej na godzinę przed pobraniem śliny, aby uniknąć wpływu wody i jedzenia na analizę.
• Aby usunąć resztki jedzenia z jamy ustnej, pacjenci zostaną poproszeni o przepłukanie jamy ustnej wodą przed pobraniem śliny.
• Po dokładnym spłukaniu należy zachować co najmniej 10-minutową przerwę przed pobraniem próbek śliny, aby uniknąć rozcieńczenia próbki.
• Pacjenci zostaną poproszeni o wyplucie śliny do wysterylizowanej probówki typu sokół o pojemności 15 ml.
• Od każdego pacjenta zostanie pobrane około 2–5 ml śliny.
• Pacjent zostanie poinformowany i poinstruowany, aby nie odkrztuszał śluzu.
• Po pobraniu śliny próbki zostaną niezwłocznie przekazane do laboratorium w celu dalszej obróbki.
• Próbki śliny będą wirowane przy 8000 obr./min przez 15 minut w temperaturze 4°C w celu usunięcia wszelkich resztek komórkowych, po czym zostanie zebrany supernatant.
• Zebrany supernatant zostanie podzielony na porcje do mikroprobówek o pojemności 1 ml i będzie przechowywany w temperaturze -80°C do czasu dalszej analizy (czas przetwarzania śliny będzie możliwie najkrótszy).

2.9.2 Analiza śliny:

Test immunoenzymatyczny (technika kanapkowa):

Poziomy CTX w próbkach śliny wszystkich grup będą analizowane techniką kanapkową ELISA (test immunoenzymatyczny). Badanie ELISA zostanie przeprowadzone przy użyciu zestawu CTX zgodnie z instrukcją producenta. W zestawie zostanie dostarczona płytka wstępnie pokryta przeciwciałem specyficznym dla ludzkiego CTX. Do studzienek płytki mikro ELISA dodaje się standardy lub próbki, co umożliwia CTX związanie się ze specyficznym przeciwciałem. Po usunięciu niezwiązanej próbki dodane zostanie biotynylowane przeciwciało wykrywające CTX, a następnie przemyte buforem. Po przemyciu płytkę inkubuje się ze streptawidyną-peroksydazą chrzanową (HRP), która wiąże się z przeciwciałem wykrywającym. Po inkubacji niezwiązana Streptawidyna-HRP zostanie wypłukana. Na koniec zostanie dodany roztwór substratu. Intensywność powstałego zabarwienia jest proporcjonalna do ilości ludzkiego CTX obecnego w próbce. Reakcję zatrzyma się przez dodanie roztworu zatrzymującego, a absorbancję zmierzy się spektrofotometrycznie przy długości fali 450 nm. Stężenie CTX w próbkach uzyskuje się poprzez porównanie absorbancji próbek ze standardami.

Test ELISA zostanie przeprowadzony przez główną badaczkę badania z pomocą jej współprzełożonego w DRIBBS (Instytut Badawczy Biotechnologii i Nauk Biomedycznych Dow).