ИССЛЕДОВАНИЕ ЭКСПРЕССИИ УРОВНЕЙ CTXI В СЛЮНЕ ПРИ РАННЕЙ И ОТДЛЕННОЙ НАГРУЗКЕ ЗУБНЫХ ИМПЛАНТАТОВ

В исследование будут включены 40 пациентов, пришедших в отделение OPD Международного стоматологического колледжа Dow для установки имплантатов в заднюю часть нижней челюсти (область коренных зубов).

Зубные имплантаты, доступные в амбулаторном отделении (OPD) Международного стоматологического колледжа Dow (DIDC), будут установлены пациентам. Зубные имплантаты будут установлены в соответствии со стандартными протоколами доктора Шахина Ахмеда.

Пациентов разделят на две группы. Пациенты группы А будут подвергаться ранней нагрузке, а группа Б – традиционной нагрузке протезами.

У каждого пациента будет оцениваться стабильность имплантата после операции, через 1, 2 и 3 месяца с помощью Periotest.

Слюна будет собрана у пациентов обеих групп перед установкой имплантата и в те же дни, что и при оценке периотестом после операции. Слюна будет переработана и немедленно сохранена при температуре -80°C. Позже будет проведен сэндвич-ИФА для экспрессионного анализа СТХ.

Уровни CTX до операции по имплантации будут служить эталонным значением в этом исследовании.

2.9.1 Метод сбора слюны:

У обеих исследовательских групп будет собрана цельная нестимулированная слюна (WUS). Процесс сбора слюны выглядит следующим образом:

• Образцы слюны будут собираться между 9 и 11 часами утра, чтобы свести к минимуму суточные колебания слюноотделения и изменения химического состава сиало.
• Пациентов попросят воздержаться от курения, питья и жевания по крайней мере за час до сбора слюны, чтобы избежать влияния воды и еды на анализ.
• Чтобы удалить остатки пищи изо рта, пациентов просят промыть рот водой перед сбором слюны.
• После тщательного промывания перед сбором образцов слюны необходимо подождать не менее 10 минут, чтобы избежать разбавления образца.
• Пациентов попросят сплюнуть слюну в стерилизованную пробирку объемом 15 мл.
• У каждого пациента будет собрано примерно 2–5 мл слюны.
• Пациента проинформируют и попросят не кашлять слизью.
• После сбора слюны образцы сразу же доставят в лабораторию для дальнейшей обработки.
• Образцы слюны центрифугируют при 8000 об/мин в течение 15 минут при температуре 4°C для удаления остатков клеток и собирают супернатант.
• Собранный супернатант разливается в микропробирки по 1 мл и хранится при -80°C до дальнейшего анализа (время обработки слюны должно быть максимально минимальным).

2.9.2 Анализ слюны:

Иммуноферментный анализ (сэндвич-метод):

Уровни CTX в образцах слюны всех групп будут анализироваться с помощью сэндвич-метода ELISA (иммуноферментный анализ). Тестирование ELISA будет проводиться с использованием набора CTX в соответствии с инструкциями производителя. В комплект входит планшет, предварительно покрытый антителом, специфичным к CTX человека. Стандарты или образцы добавляются в лунки микропланшета ELISA, что позволяет CTX связываться со специфическим антителом. После удаления несвязавшегося образца добавляют биотинилированное антитело для обнаружения CTX с последующей промывкой буфером. После промывки планшет инкубируют со стрептавидин-пероксидазой хрена (HRP), которая связывается с детектирующим антителом. После инкубации несвязавшийся стрептавидин-HRP будет смыт. Наконец, будет добавлен раствор субстрата. Интенсивность развивающегося цвета пропорциональна количеству человеческого CTX, присутствующего в образце. Реакцию останавливают добавлением стоп-раствора, а поглощение измеряют спектрофотометрически при длине волны 450 нм. Концентрацию СТХ в образцах получают путем сравнения оптической плотности образцов со стандартами.

ИФА будет проводиться главным исследователем исследования с помощью ее со-руководителя в DRIBBS (Научно-исследовательский институт биотехнологии и биомедицинских наук Доу).