歯科インプラントの早期および遅延装着による唾液中のCTXIレベルの発現の調査

この研究では、下顎後部（臼歯部）へのインプラント埋入のためにダウ国際歯科大学の OPD を訪れる 40 人の患者が募集されます。

ダウ国際歯科大学 (DIDC) の外来部門 (OPD) で利用可能な歯科インプラントが患者に埋入されます。 歯科インプラントは、シャヒーン・アーメッド博士による標準プロトコルに従って埋入されます。

患者は 2 つのグループに分けられます。 グループ A の患者には早期に装填が行われ、グループ B には従来通りのプロテーゼ装填が行われます。

各患者は、手術後 1 か月、2 か月、3 か月後にペリオテストを使用してインプラントの安定性を評価されます。

唾液は、インプラント埋入前および手術後のペリオテスト評価と同じ日に、両グループの患者から採取されます。 唾液は処理され、すぐに -80℃ で保存されます。 その後、CTX の発現分析のためにサンドイッチ ELISA が実行されます。

インプラント手術前のCTX値は本研究の参考値となります。

2.9.1 唾液の採取方法:

両方の研究グループから全非刺激唾液 (WUS) を収集します。 唾液採取の手順は以下の通りです。

• 唾液の流れの日内変動とシアロ化学の変化を最小限に抑えるために、唾液サンプルは午前9時から11時までに収集されます。
• 患者には、水や食べ物による分析への干渉を避けるため、唾液採取の少なくとも1時間前には喫煙、飲酒、咀嚼を控えるよう求められます。
• 口から食べ物の残骸を取り除くために、患者は唾液を採取する前に水で口を洗うように求められます。
• 十分にすすいだ後、サンプルの希釈を避けるために、唾液サンプルの収集前に少なくとも 10 分間の間隔を置きます。
• 患者には、15mLの滅菌済みファルコンチューブに唾液を吐き出すよう求められます。
• 各患者から約 2 ～ 5 mL の唾液が収集されます。
• 患者には粘液を咳き込まないよう説明され、指示されます。
• 唾液の収集後、サンプルはさらなる処理のために直ちに研究室に運ばれます。
• 唾液サンプルを 8000rpm、4℃で 15 分間遠心分離して細胞破片を除去し、上清を収集します。
• 収集した上清は 1 ml のマイクロチューブに等分され、さらなる分析まで -80°C で保存されます (唾液の処理時間は可能な限り短く保たれます)。

2.9.2 唾液の分析:

酵素結合免疫吸着アッセイ (サンドイッチ技術):

すべてのグループの唾液サンプル中の CTX レベルは、サンドイッチ ELISA (酵素結合免疫吸着検定法) 技術によって分析されます。 ELISA 検査は、製造元の指示に従って CTX キットを使用して実行されます。 ヒトCTXに特異的な抗体でプレコートされたプレートがキットに付属します。 標準またはサンプルをマイクロ ELISA プレートのウェルに添加すると、CTX がその特異的抗体に結合できるようになります。 未結合のサンプルを除去した後、ビオチン化 CTX 検出抗体を添加し、バッファーで洗浄します。 洗浄後、プレートを検出抗体に結合するストレプトアビジン西洋ワサビペルオキシダーゼ (HRP) とともにインキュベートします。 インキュベーション後、未結合のストレプトアビジン-HRP が洗い流されます。 最後に、基質溶液を添加します。 発色する色の強度は、サンプル中に存在するヒト CTX の量に比例します。 反応は停止液の添加によって停止され、吸光度は 450 nm の波長で分光光度的に測定されます。 サンプル中の CTX の濃度は、サンプルの吸光度を標準と比較することによって得られます。

ELISA は、DRIBBS (ダウ生物工学・生物医学科学研究所) の共同監督者の助けを得て、研究の主任研究者によって実施されます。