치과 임플란트의 조기 및 지연 로딩에 따른 타액 내 CTXI 수준 발현 조사

하악 구치부(어금니 영역)에 임플란트 식립을 위해 Dow International Dental College의 OPD에 오는 40명의 환자가 연구에 모집됩니다.

DIDC(Dow International Dental College)의 외래환자 부서(OPD)에서 제공되는 치과 임플란트가 환자에게 배치됩니다. 치과 임플란트는 Dr. Shaheen Ahmed의 표준 프로토콜에 따라 배치됩니다.

환자는 두 그룹으로 나누어집니다. 그룹 A 환자는 조기에 로드되고 그룹 B는 보철물을 장착하는 기존 로드됩니다.

각 환자는 수술 후 1개월, 2개월, 3개월에 Periotest를 통해 임플란트 안정성을 평가하게 됩니다.

임플란트 식립 전과 수술 후 Periotest 평가와 같은 날에 두 그룹의 환자로부터 타액을 수집합니다. 타액은 처리되어 즉시 -80oC에 보관됩니다. 나중에 CTX의 발현 분석을 위해 샌드위치 ELISA가 수행됩니다.

본 연구에서는 임플란트 수술 전 CTX 수준이 참고값으로 제공됩니다.

2.9.1 타액 수집 방법:

전체 비자극 타액(WUS)은 두 연구 그룹 모두에서 수집됩니다. 타액 수집 과정은 다음과 같습니다.

• 타액 샘플은 타액 흐름의 일별 변화와 시알로 화학의 변화를 최소화하기 위해 오전 9-11시 사이에 수집됩니다.
• 물과 음식이 분석에 방해가 되지 않도록 환자에게 타액 채취 최소 1시간 전에 흡연, 음주, 씹는 행위를 삼가하도록 요청합니다.
• 입에서 음식물 찌꺼기를 제거하기 위해 환자는 타액을 채취하기 전에 물로 입을 씻어야 합니다.
• 철저히 헹군 후 타액 샘플을 수집하기 전에 샘플 희석을 방지하기 위해 최소 10분의 간격을 두어야 합니다.
• 환자는 멸균된 15mL의 팔콘 튜브에 타액을 뱉어내도록 요청받습니다.
• 각 환자로부터 약 2-5mL의 타액이 수집됩니다.
• 환자에게 점액을 기침으로 토하지 말라고 지시합니다.
• 타액 수집 후 추가 처리를 위해 샘플을 즉시 실험실로 가져갑니다.
• 타액 샘플은 4˚C에서 15분 동안 8000rpm으로 원심분리하여 세포 잔해물을 제거하고 상층액을 수집합니다.
• 수집된 상청액은 1ml의 마이크로튜브에 분취되고 추가 분석이 있을 때까지 -80°C에서 보관됩니다(타액 처리 시간은 가능한 한 낮게 유지됩니다).

2.9.2 타액 분석:

효소 결합 면역흡착 분석(샌드위치 기법):

모든 그룹의 타액 샘플에서 CTX 수준은 샌드위치 ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent Assay) 기술로 분석됩니다. ELISA 테스트는 제조업체의 지시에 따라 CTX 키트를 사용하여 수행됩니다. Human CTX에 특이적인 항체가 미리 코팅된 플레이트가 키트와 함께 제공됩니다. CTX가 특정 항체에 결합할 수 있도록 표준 또는 샘플이 마이크로 ELISA 플레이트 웰에 추가됩니다. 결합되지 않은 샘플을 제거한 후 비오티닐화 CTX 검출 항체를 첨가한 후 완충액으로 세척합니다. 세척 후, 플레이트는 검출 항체에 결합하는 스트렙타비딘-호세래디쉬 퍼옥시다제(HRP)와 함께 배양됩니다. 배양 후 결합되지 않은 Streptavidin-HRP는 세척됩니다. 마지막으로 기질 용액이 추가됩니다. 발색된 색상의 강도는 샘플에 존재하는 인간 CTX의 양에 비례합니다. 정지 용액을 첨가하면 반응이 중단되고 흡광도는 450nm 파장에서 분광광도계로 측정됩니다. 샘플의 CTX 농도는 샘플의 흡광도를 표준과 비교하여 얻습니다.

ELISA는 DRIBBS(Dow Research Institute of Biotechnology and Biomedical Sciences)의 공동 감독자의 도움을 받아 연구의 수석 조사관이 수행합니다.