电化学疗法引起皮肤黑色素瘤患者皮肤和皮下转移瘤微环境的变化

该研究具有前瞻性。 主要目的是根据治疗前后已治疗和未治疗转移瘤的组织学分析，评估电化学疗法 (ECT) 诱导的皮肤和皮下黑色素瘤转移瘤微环境的变化。 第二个目的是确定肿瘤微环境的变化是否因所使用的化疗药物而异。

在该研究中，将招募 10-15 名患者，并分为两组：使用博来霉素的 ECT 和使用顺铂的 ECT。

ECT 将提供给患有可爱黑色素瘤且至少有 5 个在途或远处皮肤和/或皮下黑色素瘤转移的患者，无论之前的治疗如何。 该决定将由多学科肿瘤委员会做出。 化疗药物的选择取决于待治疗病变的大小和数量。 纳入研究对免疫疗法治疗时机的决定没有影响。 免疫疗法治疗稍后将作为统计分析的一个因素。

ECT 将根据 ECT 治疗皮肤和皮下肿瘤的标准操作程序进行。 ECT 将在静脉推注博莱霉素（15.000 IU/m2 BSA）或直接在肿瘤内施用顺铂（0.5-2 mg/cm3 肿瘤）后。 CliniporatorTM（IGEA S.P.A.，Carpi，意大利）将用于施加脉冲（8 个脉冲，1300 V/cm，100 μs，5 kHz）。 电脉冲的触发将通过心电图触发装置 AccuSync 与心电图信号同步，以避免在心脏脆弱时期传递脉冲。 所使用的电极类型将根据肿瘤的大小和位置来选择。

在 ECT 之前将切除一处皮肤/皮下转移瘤。 手术后 2-4 天和 9-13 天将切除一处经过治疗的皮肤/皮下转移瘤。 未经治疗的皮肤/皮下转移瘤将在第 9-13 天切除。 切除将在局部麻醉下进行。 所有患者将在向他们详细解释程序和研究并签署知情同意书后参加研究。 将在同一时间点（ECT 之前、ECT 后 2-4 天和 9-13 天）采集静脉血样本。

将根据标准化程序对 2-3 μm 厚的组织切片进行组织学检查，评估消退程度和肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL) 的存在，这些组织切片预先固定在福尔马林中并包埋在石蜡 (FFPE) 中，用苏木精-伊红（HE）染色方法。

肿瘤微环境的免疫组织化学特征将在预先固定在福尔马林中并包埋在石蜡中的 2-4 μm 厚的组织切片上进行。 我们将使用市售的一抗单克隆抗体来定义肿瘤炎症浸润、间质和脉管系统。 我们将使用以下抗体：CD3、CD4、CD8、CD56、CD163、FoxP3、ERG、PGM1、CD274 (PD-L1)。 所用抗体的选择和病理组织学分析的方法可能会根据结果而改变。 一抗的特异性结合将使用推荐的三步检测系统 OptiView DAB IHC 检测试剂盒（货号：1000）进行可视化。 760-700号；由 Ventana ROCHE inc.（图森，亚利桑那州，美国）根据制造商的说明制造。 分析将由两名独立的病理学家进行。

我们还将收集有关皮肤黑色素瘤既往治疗的信息以及 ECT 治疗效果的照片记录。 患者还将在接受治疗时、ECT 后、ECT 后 3 个月、6 个月和 12 个月填写国际认可的、经过验证的生活质量调查问卷（EORTC QLQ-C 30 和 EQ-5D-5L），然后在后续期间每年填写一次上升期。