Elektrochemoterapie indukuje změny v nádorovém mikroprostředí kožních a podkožních metastáz u pacientů s kožním melanomem

Studie je prospektivní. Primárním cílem je zhodnotit změny v nádorovém mikroprostředí kožních a subkutánních metastáz melanomu indukovaných elektrochemoterapií (ECT), na základě histologické analýzy léčených a neléčených metastáz před a po léčbě. Sekundárním cílem je zjistit, zda se změny v mikroprostředí nádoru liší v závislosti na použitém chemoterapeutiku.

Do studie bude zařazeno 10-15 pacientů, kteří budou rozděleni do dvou ramen, ECT s bleomycinem a ECT s cysplatinou.

ECT bude nabízena pacientům s kožním melanomem a nejméně 5 tranzitními nebo vzdálenými kožními a/nebo subkutánními metastázami melanomu bez ohledu na předchozí léčbu. Rozhodnutí bude učiněno v multidisciplinárním nádorovém výboru. Výběr chemoterapeutika bude záviset na velikosti a počtu lézí, které mají být léčeny. Zařazení do studie nemá vliv na rozhodnutí o načasování léčby imunoterapií. Léčba imunoterapií bude později zahrnuta jako faktor do statistické analýzy.

ECT bude prováděna podle standardních operačních postupů pro léčbu kožních a podkožních nádorů pomocí ECT. ECT bude provedena během 8-28 minut po intravenózním bolusovém podání bleomycinu (15 000 IU/m2 BSA) nebo přímo po intratumorálním podání cysplatiny (0,5-2 mg/cm3 tumoru). K aplikaci pulzů bude použit CliniporatorTM (IGEA S.P.A., Carpi, Itálie) (8 pulzů, 1300 V/cm, 100 μs, 5 kHz). Spouštění elektrických pulzů bude synchronizováno se signály EKG prostřednictvím spouštěcího zařízení EKG AccuSync, aby se zabránilo dodávání pulzů ve zranitelném období srdce. Typ použité elektrody bude vybrán podle velikosti a umístění nádorů.

Před ECT bude vyříznuta jedna kožní/subkutánní metastáza. Jedna léčená kožní/subkutánní metastáza bude vyříznuta 2-4 a 9-13 dnů po výkonu. Neléčená kožní/subkutánní metastáza bude vyříznuta v den 9-13. Excize budou prováděny v lokální anestezii. Všichni pacienti budou zařazeni do studie poté, co jim byly podrobně vysvětleny postupy a studie a podepsáni informovaný souhlas. Vzorek žilní krve bude odebrán ve stejných časových bodech (před ECT, 2–4 dny a 9–13 dnů po ECT).

Histologické vyšetření, posouzení stupně regrese a přítomnosti tumor infiltrujících lymfocytů (TIL) bude provedeno podle standardizovaných postupů na řezech tkání o tloušťce 2-3 μm, předem fixovaných ve formalínu a zalitých v parafínu (FFPE), obarvených metoda barvení hematoxylin-eozin (HE).

Imunohistochemická charakterizace nádorového mikroprostředí bude provedena na tkáňových řezech o tloušťce 2-4 μm předem fixovaných ve formalínu a zalitých v parafínu. K definici nádorového zánětlivého infiltrátu, stromatu a vaskulatury použijeme komerčně dostupné primární monoklonální protilátky. Použijeme tyto protilátky: CD3, CD4, CD8, CD56, CD163, FoxP3, ERG, PGM1, CD274 (PD-L1). Volba použitých protilátek a metoda patohistologické analýzy se mohou měnit v závislosti na výsledcích. Specifická vazba primárních protilátek bude vizualizována pomocí doporučeného třífázového detekčního systému OptiView DAB IHC Detection Kit (kat. č. 760-700; výrobce Ventana ROCHE inc., Tucson, AZ, USA) podle pokynů výrobce. Analýza bude provedena dvěma nezávislými patology.

Shromáždíme také informace o předchozí léčbě kožního melanomu a fotografickou dokumentaci účinnosti léčby ECT. Pacienti také vyplní mezinárodně uznávané, validované dotazníky kvality života (EORTC QLQ-C 30 a EQ-5D-5L) při nástupu, po ECT, 3 měsíce, 6 měsíců a 12 měsíců po ECT a poté jednou ročně během sledování období.