Elektrokemoterapi inducerar förändringar i tumörmikromiljön av kutana och subkutana metastaser hos patienter med kutant melanom

Studien är prospektiv. Det primära målet är att utvärdera förändringarna i tumörmikromiljön av kutana och subkutana melanommetastaser inducerade av elektrokemoterapi (ECT), baserat på histologisk analys av behandlade och obehandlade metastaser före och efter behandling. Det sekundära syftet är att avgöra om förändringarna i tumörens mikromiljö skiljer sig åt beroende på vilket kemoterapeutiskt medel som används.

I studien kommer 10-15 patienter att inkluderas och delas upp i två armar, ECT med bleomycin och ECT med cysplatin.

ECT kommer att erbjudas patienter med kutant melanom och minst 5 in-transit eller avlägsna kutana och/eller subkutana melanommetastaser oavsett tidigare behandlingar. Beslutet kommer att tas i en multidisciplinär tumörnämnd. Valet av kemoterapeutiskt läkemedel kommer att bero på storleken och antalet lesioner som ska behandlas. Inkludering i studien har ingen inverkan på beslutet om tidpunkt för behandling med immunterapi. Behandling med immunterapi kommer senare att ingå som en faktor i den statistiska analysen.

ECT kommer att utföras enligt de vanliga operationsprocedurerna för behandling av kutana och subkutana tumörer med ECT. ECT kommer att utföras inom 8 - 28 minuter efter intravenös bolusadministrering av bleomycin (15 000 IE/m2 BSA) eller direkt efter intratumoral administrering av cysplatin (0,5-2 mg/cm3 tumör). CliniporatorTM (IGEA S.P.A., Carpi, Italien) kommer att användas för att applicera pulserna (8 pulser, 1300 V/cm, 100 μs, 5 kHz). Triggning av de elektriska pulserna kommer att synkroniseras med EKG-signaler, genom EKG-triggningsenheten AccuSync för att undvika leverans av pulser under en sårbar period av hjärtat. Typen av elektrod som används kommer att väljas i enlighet med storleken och placeringen av tumörerna.

En kutan/subkutan metastasering kommer att avlägsnas före ECT. En behandlad kutan/subkutan metastasering kommer att skäras ut 2-4 och 9-13 dagar efter ingreppet. En obehandlad kutan/subkutan metastasering kommer att skäras ut dag 9-13. Utskärningarna kommer att utföras under lokalbedövning. Alla patienter kommer att registreras i studien efter att procedurerna och studien har förklarats för dem i detalj och de har undertecknat ett informerat samtycke. Ett venöst blodprov kommer att tas vid samma tidpunkter (före ECT, 2-4 dagar och 9-13 dagar efter ECT).

Histologisk undersökning, bedömning av graden av regression och närvaron av tumörinfiltrerande lymfocyter (TIL) kommer att utföras enligt standardiserade procedurer på 2-3 μm tjocka vävnadssnitt, tidigare fixerade i formalin och inbäddade i paraffin (FFPE), färgade med hematoxylin-eosin (HE) färgningsmetod.

Immunhistokemisk karakterisering av tumörens mikromiljö kommer att utföras på 2-4 μm tjocka vävnadssektioner förfixerade i formalin och inbäddade i paraffin. Vi kommer att använda kommersiellt tillgängliga primära monoklonala antikroppar för att definiera det tumörinflammatoriska infiltratet, stroma och vaskulaturen. Vi kommer att använda följande antikroppar: CD3, CD4, CD8, CD56, CD163, FoxP3, ERG, PGM1, CD274 (PD-L1). Valet av antikroppar som används och metoden för patohistologisk analys kan ändras beroende på resultaten. Specifik bindning av primära antikroppar kommer att visualiseras med det rekommenderade trestegsdetektionssystemet OptiView DAB IHC Detection Kit (kat. nr 760-700; tillverkad av Ventana ROCHE inc., Tucson, AZ, USA) enligt tillverkarens instruktioner. Analysen kommer att utföras av två oberoende patologer.

Vi kommer även att samla in information om tidigare behandlingar för kutant melanom och fotografisk dokumentation av ECT-behandlingens effektivitet. Patienterna kommer också att fylla i internationellt erkända, validerade frågeformulär för livskvalitet (EORTC QLQ-C 30 och EQ-5D-5L) vid entollation, efter ECT, 3 månader, 6 månader och 12 månader efter ECT och sedan en gång om året under följande upp-period.