加利利医疗中心生化实验室的血浆草酸盐水平验证测试

体内草酸盐的来源是肝脏的内源性产生和营养。 草酸盐通过肾脏随尿液排出。 如果尿液中草酸过多，它可能会与钙一起结晶，并以草酸钙晶体的形式沉淀在肾脏中，从而导致肾脏损伤。 如果肾脏严重受损，尿液中草酸盐的分泌就会受到损害，草酸盐会在血液中积聚并沉积在身体的所有组织中，包括眼睛、骨骼、骨髓、血管等。 体内草酸盐含量高的情况是由中毒（乙二醇）或继发性高草酸尿症引起的，例如囊性纤维化或炎症性肠病（脂肪腹泻时肠道对草酸盐的吸收增加） ）或原发性高草酸尿症。

原发性高草酸尿症是由于肝脏草酸盐代谢途径的遗传缺陷，导致肝脏排泄草酸盐增多而引起的一组疾病。 1 型高草酸尿症 (PH1) 是整个组中最严重的一种，在大多数患者二十岁时会导致肾衰竭。 直到最近，PH1 的治疗还是基于肝移植，以恢复正常的酶，在大多数情况下还需要肾移植。 2021 年 11 月，FDA 批准了一种治疗高草酸尿症的突破性药物 LUMASIRAN。

加利利医疗中心的小儿肾脏科是高草酸尿症的专家中心。 加利利地区的人口中该疾病的发病率是世界上最高的之一，因此我们中心在治疗该疾病方面积累了大量的经验。

此外，儿科肾病科还被用作ALNYLAM公司临床研究的中心，以测试药物LUMASIRAN的有效性和安全性。 现在有 8 名 PH1 患者正在接受新药（通过研究或通过健康篮），他们正在我们机构的儿科肾病科接受监测。

主要在高草酸尿症患者的情况下需要检测血浆中的草酸盐水平，主要目的是监测对治疗的反应或为肾移植的决定做准备。 在其他情况下，执行上述测试也很重要，但这些情况很少见。 以色列没有测试血浆中草酸盐水平的实验室。

有几个实验室，其中包括加利利医疗中心的生物化学实验室，可以进行尿液中的草酸盐水平测试。 尿液检测是在怀疑高草酸尿症的情况下进行的初步调查，也是肾结石疾病调查的一部分。

在 PH1 药物治疗出现之前，当最终治疗基于肝移植时，以色列习惯上仅监测尿液中的草酸盐。 在美国和欧洲，习惯上在肝移植后监测血浆草酸水平，当水平下降到接近正常值时，建议进行肾移植。 在死者捐献肝脏和肾脏的情况下，延迟肾移植是不可接受的，以色列有一些中心在肝肾移植后进行一段时间的透析，同时监测血浆草酸盐水平，例如如上所述，肝脏/肝肾移植后不习惯进行透析，并且移植后不习惯监测血浆草酸水平。

新药治疗获批后，情况发生了变化。 Lumisiren 将于 2022 年进入以色列所有 PH1 患者的健康篮子。 该治疗取代了肝移植，因此在以下情况下需要监测血浆中的草酸盐水平：

1. 监测不排尿的透析患者对 lumsiren 治疗的反应（因此不可能监测尿液中草酸盐的减少）
2. 一名正在接受 lumsiran 治疗的晚期肾衰竭 PH1 患者正在准备进行肾移植。 根据最新建议，需等待血浆中草酸盐降至70微摩尔/升以下，才能进行肾移植
3. 在接受 lumesiren 治疗的患者进行肾移植后，出于风险评估的目的，并且如果血浆中草酸盐含量较高，则需要在移植后进行透析以保护肾脏。

与检测尿液中的草酸盐水平相比，检测血浆中的草酸盐并不简单，因为尿液中的草酸值比血浆中的值高一个数量级（尿液中的草酸值是毫摩尔/升，血浆中的草酸值是微摩尔/升）并且市场上有可用的测试在较高浓度下更敏感。 此外，草酸盐不稳定：在相对碱性环境（4pH>）中，抗坏血酸会转变为草酸盐，因此在测试准备阶段需要对血浆进行酸化。

我们的生化实验室用于检测尿液中草酸盐的试剂盒基于草酸氧化酶和显色反应（库仑法），购自 Biotech Trinity。 根据制造商的说明，该试剂盒用于检测尿液中的草酸盐水平。 该测试在我们的实验室中进行，并根据制造商的说明进行了内部验证。

世界各地的实验室对血浆中草酸盐水平的测试有两种类型 - 有些实验室使用基于 TRINITY BIOTECH 试剂盒和分光光度法的酶测试，有些实验室使用质谱方法（气体或离子）。

第二种方法（质谱法）被认为对血浆中的草酸盐准确，但相当昂贵，我们的实验室无法使用。 草酸氧化酶的使用已被世界领先实验室的研究和临床需求所接受。

在柏林 CHARITE 大学医院的生化实验室中，血浆中的草酸盐测试广泛用于临床和研究目的。 CHARITE 医院的肾脏病学实验室和科室被认为是高草酸尿症领域的世界领先者，并发表了使用 TRINITY 试剂盒中的酶法测量血浆草酸盐的研究。

鉴于需要在以色列进行草酸盐血浆测试，并且作为以色列高草酸尿症领域的领先中心，研究人员有兴趣将测试放在我们机构的生化实验室中。 根据本实验室现有的手段，在测试了基于草酸氧化酶的酶法检测的效率和可靠性后，研究人员决定在我们实验室对草酸血浆检测进行验证。 由于制造商指定该试剂盒仅用于尿液检测，因此不可能根据制造商的检测试剂盒进行验证，研究人员需要外部验证。 在迄今为止的试点测试中，研究人员根据患者的临床状况获得了可接受的值。

柏林 CHARITE 医院的 Knopf 教授慷慨地同意为我们的生化实验室进行的血浆草酸盐测试进行外部验证。

方法：

样本数量：总共将从 30 名不同患者身上采集 30 份血液样本。 样本将从不同的患者身上采集，以获得广泛的血浆草酸盐水平。 约10个样本取自健康志愿者，约10个样本取自无高草酸尿症背景的透析患者，约5个样本取自接受药物治疗或肝移植后的高草酸尿症患者，约5个样本取自未进行透析的晚期肾衰竭患者。

测试协议 - 附在附录中。 该方案与进行外部验证的实验室兼容。

每个样本将立即灭菌，血浆将分装到两个试管中并冷冻保存（-80）。 一根试管将被送往柏林实验室进行测试，一根试管将留在我们的实验室进行测试。

处理样品直至冷冻的步骤与此处执行的步骤相同。

这里实验室的样品处理过程将由一名实验室员工执行。

这些样本将被冷冻送往柏林的实验室。 第二步——解冻后样品的处理——将根据两个实验室之间商定的方案进行，以避免样品处理上的差异。 此外，研究人员还会协调两个实验室的检测天数，以避免样本在冰箱中的保存时间出现差异。

该方案是我们与柏林实验室联合编写的。 样品的运输将由麦迪逊制药公司资助，作为其支持该项目的一部分，该项目旨在提高加利利高草酸尿症患者的认识并改善其服务。

统计数据 - 在收到来自柏林的测试答案后，调查人员将使用以下测试来比较那里和这里获得的结果：

定量数据将使用均值和标准差、中位数、四分位距 (IQR) 和极差来描述。

配对样本的比较检验 - 使用配对样本 T 检验（如果差异呈正态分布）或 Wilcoxon 符号秩检验（如果差异分布不正常）检查两个配对样本之间的差异。 将为配对样本之间的差异计算 95% 置信区间。

相关性测试 - 测试配对样本之间的关系。 Pearson相关系数检验或Spearman相关系数检验（根据样本大小和分布形状选择）Bland-Altman图和散点图曲线用于证明结果之间的差异。

P 值低于 5% 将被视为具有统计显着性。

保持匿名：样品将标有此处给出的代码，但不会在表格或试管上识别详细信息。 编码表将单独保存在首席研究员的计算机上，并在研究协调员的衣柜中单独保存在文件夹中。

知情同意书：志愿者在解释测试意义后签署知情同意书。