使用自体外泌体与血小板生长因子来再生不孕妇女的卵巢 (Exosomas2024-1) (Exosom2024-1)

方法论和研究进展

本研究是一项观察性、前瞻性、随机、比较、双盲和分析性调查，于 2024 年 1 月至 2024 年 9 月在委内瑞拉加拉加斯的一家生育诊所进行。 该研究涉及对 30 名年龄在 38 至 46 岁、卵巢储备功能低下、希望使用自己的卵子受孕并拒绝卵子捐赠的患者进行卵巢生物刺激或生物再生手术。

患者选择标准基于研究开始时表明卵巢储备下降的参数。 其中包括在每位患者月经周期第三天测量的激素水平：卵泡刺激素 (FSH) 大于 12 mIU/mL，雌二醇小于 35 pg/mL，抗苗勒氏管激素 (AMH) 小于 0.7 ng/mL毫升。 此外，患者必须提供两个卵巢的窦卵泡总数少于五个卵泡，以证实卵巢储备功能低或卵巢抵抗力，并有记录拒绝使用捐赠卵子。

根据三个不同的治疗组实施卵巢内注射方案：

从患者血小板、活化血小板生长因子和生理溶液中获得的自体外泌体（对照组）。

该手术共进行四个周期，每月一次，在月经的第 7、8 或 9 天进行。 使用由训练有素的护士管理的随机列表将患者随机分配到三组中的一组，该列表根据到达顺序确定分配。 各组分布如下：

第 1 组：接受源自自身血小板的自体外泌体的患者。

第 2 组：接受活化血小板生长因子的患者。 第 3 组：接受生理溶液作为安慰剂的患者。

纳入和排除标准

纳入标准：

• 女性患者年龄38至46岁。
• 想要怀孕的患者。
• 体重指数 (BMI) 在 23 至 30 之间的患者。
• 根据指定参数诊断患有卵巢功能衰竭的患者。
• 患者拒绝捐献卵子。
• 患者在充分了解研究后提供知情同意书。
• 无活动性卵巢或其他肿瘤病理、子宫内膜异位症或疑似肿瘤的患者。
• 血小板计数超过25万且无血液病史的患者。
• 未接受抗凝治疗或出现活动性感染的患者。

排除标准：

• 指定年龄范围（38-46 岁）之外的患者。
• 不愿怀孕的患者。
• BMI 超出 23-30 范围的患者。
• 无卵巢功能衰竭或拒绝参与且未提供知情同意书的患者。
• 患有肿瘤疾病或疑似肿瘤的患者。
• 血小板计数低于 250,000 的患者。
• 有血液病史、正在进行抗凝治疗或活动性感染的患者。

初步评估后，获得知情同意，并进行基线实验室测试。 在第一次生物刺激之前从每位患者的月经周期第三天采集血样，以测量每个卵巢的 FSH、LH、雌二醇、AMH 和窦卵泡计数。 在第四次生物刺激之后和开始生育程序之前重复这些相同的测试。

所有血液样本均在加拉加斯的临床实验室进行冷冻和同时分析，以尽量减少偏差。 建议患者在每次手术前后五天内遵循不含乳制品和加工碳水化合物的饮食。 此外，鼓励他们每天食用两次无味明胶以提高血小板质量。

手术是在诊所手术室的受控镇静下进行的。 使用带有分离胶的 PRP 试剂盒从所有患者身上采集外周血，确保所有组的采集和处理方案相同。 使用真空采血管系统在轻柔压缩（避免使用止血带）下从肘静脉抽取血样，并在 270g 下离心 10 分钟。

治疗组：

自体外泌体组：使用 EXOSMART 试剂盒处理 PRP 以分离血小板外泌体。 获得每毫升含有5-6万亿外泌体的6cc浓缩物，每个卵巢注射3cc。

血小板生长因子组：配制活化PRP，向各卵巢注射3cc。

对照组：患者每个卵巢注射3cc生理溶液。

使用经阴道超声引导的卵泡抽吸针经阴道进行注射。 该手术是在卵泡早期（第 7-9 天）在手术镇静下进行的。