Utilizzo di esosomi autologhi rispetto a fattori di crescita piastrinici per rigenerare l'ovaio nelle donne con infertilità (Exosomas2024-1) (Exosom2024-1)

METODOLOGIA E SVILUPPO DEGLI STUDI

Questo studio è un'indagine osservazionale, prospettica, randomizzata, comparativa, in doppio cieco e analitica condotta presso una clinica della fertilità a Caracas, Venezuela, da gennaio 2024 a settembre 2024. Lo studio prevedeva una procedura di biostimolazione o biorigenerazione ovarica eseguita su 30 pazienti di età compresa tra 38 e 46 anni con bassa riserva ovarica che desideravano concepire utilizzando i propri ovuli e hanno rifiutato la donazione di ovociti.

I criteri di selezione delle pazienti erano basati su parametri indicativi di una ridotta riserva ovarica all'inizio dello studio. Questi includevano i livelli ormonali misurati il ​​terzo giorno del ciclo mestruale di ciascuna paziente: ormone follicolo-stimolante (FSH) superiore a 12 mIU/ml, estradiolo inferiore a 35 pg/ml e ormone antimulleriano (AMH) inferiore a 0,7 ng/ml. ml. Inoltre, le pazienti dovevano presentare una conta totale dei follicoli antrali inferiore a cinque follicoli in entrambe le ovaie, confermando una bassa riserva ovarica o resistenza ovarica, insieme a un rifiuto documentato di utilizzare ovociti donati.

È stato implementato un protocollo di iniezione intraovarica basato su tre diversi gruppi di trattamento:

Esosomi autologhi ottenuti dalle piastrine del paziente, Fattori di crescita piastrinici attivati ​​e Soluzione fisiologica (gruppo di controllo).

Questa procedura è stata eseguita su quattro cicli, una volta al mese, nei giorni 7, 8 o 9 delle mestruazioni. I pazienti sono stati assegnati in modo casuale a uno dei tre gruppi utilizzando un elenco randomizzato gestito da un infermiere qualificato che ha determinato l'assegnazione in base all'ordine di arrivo. I gruppi sono stati così distribuiti:

Gruppo 1: pazienti che ricevono esosomi autologhi derivati ​​dalle proprie piastrine.

Gruppo 2: pazienti che ricevono fattori di crescita piastrinici attivati. Gruppo 3: Pazienti che ricevono una soluzione fisiologica come placebo.

Criteri di inclusione ed esclusione

Criteri di inclusione:

• Pazienti di sesso femminile di età compresa tra 38 e 46 anni.
• Pazienti che desiderano concepire.
• Pazienti con un indice di massa corporea (BMI) compreso tra 23 e 30.
• Pazienti con diagnosi di insufficienza ovarica, in base ai parametri specificati.
• Pazienti che rifiutano la donazione di ovociti.
• Pazienti che hanno fornito il consenso informato dopo aver compreso appieno lo studio.
• Pazienti senza patologie ovariche attive o altre patologie oncologiche, endometriomi o sospetti tumori.
• Pazienti con una conta piastrinica superiore a 250.000 e senza storia di malattie ematologiche.
• Pazienti non sottoposti a terapia anticoagulante o che presentano infezioni attive.

Criteri di esclusione:

• Pazienti al di fuori della fascia di età specificata (38-46 anni).
• Pazienti non disposti a concepire.
• Pazienti con un BMI esterno all'intervallo 23-30.
• Pazienti senza insufficienza ovarica o che hanno rifiutato di partecipare e non hanno fornito il consenso informato.
• Pazienti con malattie oncologiche o sospetti tumori.
• Pazienti con una conta piastrinica inferiore a 250.000.
• Pazienti con anamnesi di malattie ematologiche, terapia anticoagulante in corso o infezioni attive.

Dopo la valutazione iniziale, è stato ottenuto il consenso informato e sono stati condotti i test di laboratorio di base. Campioni di sangue sono stati raccolti da ciascuna paziente il terzo giorno del ciclo mestruale prima della prima biostimolazione per misurare FSH, LH, estradiolo, AMH e conta dei follicoli antrali in ciascuna ovaia. Questi stessi test sono stati ripetuti dopo la quarta biostimolazione e prima di iniziare le procedure di fertilità.

Tutti i campioni di sangue sono stati congelati e analizzati simultaneamente presso un laboratorio clinico a Caracas per ridurre al minimo gli errori. Ai pazienti è stato consigliato di seguire una dieta priva di latticini e carboidrati trasformati per cinque giorni prima e dopo ogni procedura. Inoltre, sono stati incoraggiati a consumare gelatina non aromatizzata due volte al giorno per migliorare la qualità delle piastrine.

Le procedure sono state eseguite sotto sedazione controllata nella sala operatoria della clinica. Il sangue periferico è stato raccolto da tutti i pazienti utilizzando un kit PRP con gel separatore, garantendo protocolli di raccolta e trattamento identici in tutti i gruppi. I campioni di sangue sono stati prelevati dalla vena cubitale utilizzando un sistema vacutainer sotto leggera compressione (evitando l'uso del laccio emostatico) e centrifugati a 270 g per 10 minuti.

Gruppi di trattamento:

Gruppo di esosomi autologhi: il PRP è stato elaborato utilizzando il kit EXOSMART per isolare gli esosomi piastrinici. È stato ottenuto un concentrato di 6 cc contenente 5-6 trilioni di esosomi per millilitro e 3 cc sono stati iniettati in ciascuna ovaia.

Gruppo del fattore di crescita piastrinico: è stato preparato il PRP attivato e 3 cc sono stati iniettati in ciascuna ovaia.

Gruppo di controllo: le pazienti hanno ricevuto 3 cc di soluzione fisiologica iniettati in ciascuna ovaia.

Le iniezioni sono state eseguite per via transvaginale utilizzando un ago per aspirazione follicolare guidato da ecografia transvaginale. Le procedure sono state condotte durante la fase follicolare iniziale (giorni 7-9) sotto sedazione chirurgica.