Uso de exossomos autólogos versus fatores de crescimento plaquetário para regenerar o ovário em mulheres com infertilidade (Exosomas2024-1) (Exosom2024-1)

METODOLOGIA E DESENVOLVIMENTO DO ESTUDO

Este estudo é uma investigação observacional, prospectiva, randomizada, comparativa, duplo-cega e analítica realizada em uma clínica de fertilidade em Caracas, Venezuela, de janeiro de 2024 a setembro de 2024. O estudo envolveu um procedimento de bioestimulação ou bioregeneração ovariana realizado em 30 pacientes com idades entre 38 e 46 anos com baixa reserva ovariana que desejavam conceber usando seus próprios óvulos e recusaram a doação de óvulos.

Os critérios de seleção dos pacientes basearam-se em parâmetros indicativos de diminuição da reserva ovariana no início do estudo. Estes incluíram níveis hormonais medidos no terceiro dia do ciclo menstrual de cada paciente: Hormônio Folículo Estimulante (FSH) superior a 12 mUI/mL, Estradiol inferior a 35 pg/mL e Hormônio Anti-Mülleriano (AMH) inferior a 0,7 ng/mL. mL. Além disso, as pacientes tinham que apresentar uma contagem total de folículos antrais inferior a cinco folículos em ambos os ovários, confirmando baixa reserva ovariana ou resistência ovariana, juntamente com uma recusa documentada em usar óvulos de doadores.

Um protocolo de injeção intraovariana foi implementado com base em três grupos de tratamento diferentes:

Exossomos Autólogos obtidos de plaquetas do paciente, Fatores de Crescimento Plaquetário Ativados e Solução Fisiológica (grupo controle).

Este procedimento foi realizado ao longo de quatro ciclos, uma vez por mês, nos dias 7, 8 ou 9 da menstruação. Os pacientes foram distribuídos aleatoriamente em um dos três grupos usando uma lista aleatória gerenciada por uma enfermeira treinada que determinou a alocação com base na ordem de chegada. Os grupos foram distribuídos da seguinte forma:

Grupo 1: Pacientes recebendo exossomos autólogos derivados de suas próprias plaquetas.

Grupo 2: Pacientes recebendo fatores de crescimento plaquetário ativados. Grupo 3: Pacientes que receberam solução fisiológica como placebo.

Critérios de inclusão e exclusão

Critérios de inclusão:

• Pacientes do sexo feminino com idade entre 38 e 46 anos.
• Pacientes que desejam engravidar.
• Pacientes com Índice de Massa Corporal (IMC) entre 23 e 30.
• Pacientes com diagnóstico de insuficiência ovariana, com base nos parâmetros especificados.
• Pacientes que recusam doação de óvulos.
• Pacientes que forneceram consentimento informado após compreensão completa do estudo.
• Pacientes sem patologias ovarianas ativas ou outras patologias oncológicas, endometriomas ou suspeita de tumores.
• Pacientes com contagem de plaquetas superior a 250.000 e sem histórico de doenças hematológicas.
• Pacientes que não estejam em terapia anticoagulante ou que apresentem infecções ativas.

Critérios de exclusão:

• Pacientes fora da faixa etária especificada (38-46 anos).
• Pacientes que não desejam engravidar.
• Pacientes com IMC fora da faixa de 23-30.
• Pacientes sem insuficiência ovariana ou que se recusaram a participar e não forneceram consentimento informado.
• Pacientes com doenças oncológicas ou suspeita de tumores.
• Pacientes com contagem de plaquetas abaixo de 250.000.
• Pacientes com histórico de doenças hematológicas, terapia anticoagulante em andamento ou infecções ativas.

Após a avaliação inicial, foi obtido o consentimento informado e foram realizados testes laboratoriais de base. Amostras de sangue foram coletadas de cada paciente no terceiro dia do ciclo menstrual antes da primeira bioestimulação para medir FSH, LH, estradiol, AMH e contagem de folículos antrais em cada ovário. Esses mesmos testes foram repetidos após a quarta bioestimulação e antes de iniciar os procedimentos de fertilidade.

Todas as amostras de sangue foram congeladas e analisadas simultaneamente em um laboratório clínico em Caracas para minimizar vieses. Os pacientes foram orientados a seguir uma dieta livre de laticínios e carboidratos processados ​​por cinco dias antes e depois de cada procedimento. Além disso, eles foram incentivados a consumir gelatina sem sabor duas vezes ao dia para melhorar a qualidade das plaquetas.

Os procedimentos foram realizados sob sedação controlada no centro cirúrgico da clínica. O sangue periférico foi coletado de todos os pacientes utilizando um kit PRP com gel separador, garantindo protocolos idênticos de coleta e processamento em todos os grupos. Amostras de sangue foram coletadas da veia cubital por meio de sistema vacutainer sob compressão suave (evitando o uso de torniquete) e centrifugadas a 270g por 10 minutos.

Grupos de tratamento:

Grupo Exossomo Autólogo: O PRP foi processado usando o kit EXOSMART para isolar exossomos plaquetários. Foi obtido um concentrado de 6 cc contendo 5-6 trilhões de exossomos por mililitro e 3 cc foram injetados em cada ovário.

Grupo Fator de Crescimento Plaquetário: PRP ativado foi preparado e 3 cc foram injetados em cada ovário.

Grupo Controle: Os pacientes receberam 3 cc de solução fisiológica injetados em cada ovário.

As injeções foram realizadas por via transvaginal usando uma agulha de aspiração folicular guiada por ultrassom transvaginal. Os procedimentos foram realizados durante a fase folicular inicial (dias 7-9) sob sedação cirúrgica.