Studium LMP1- a LMP2-specifických cytotoxických T-lymfocytů (CTL) (DELLA)

Zatímco pacienti s nazofaryngeálním karcinomem (NPC) mohou být vyléčeni chemoterapií a radioterapií, vyhlídky pro pacienty, kteří jsou rezistentní na tuto léčbu nebo kteří recidivují, jsou špatné. Téměř všichni pacienti s nediferencovaným karcinomem nosohltanu mají ve svých nádorech virus EBV, který může být cílem imunoterapeutických přístupů. Úspěšně jsme použili specializované buňky imunitního systému pěstované v laboratoři a trénované k rozpoznání a zabíjení buněk infikovaných EBV (EBV-specifické cytotoxické T-lymfocyty [EBV-CTL]) k prevenci a léčbě dalšího typu rakoviny zvaného posttransplantační lymfom, ke kterému dochází po transplantaci kostní dřeně. U posttransplantačního lymfomu mají nádorové buňky na svém povrchu 9 proteinů produkovaných EBV. U karcinomu nosohltanu, který se vyvíjí u pacientů s normálním imunitním systémem, však nádorové buňky exprimují pouze 2 proteiny EBV, které jsou pro imunitní systém mnohem obtížnější rozpoznat. V předchozí studii jsme vyrobili EBV-CTL, který rozpoznával všech 9 proteinů a podával je pacientům s NPC. U pacientů bez známek aktivního onemocnění v době terapie zůstává onemocnění v remisi. U pacientů s aktivním onemocněním v době, kdy dostávali CTL, měli někteří pacienti částečnou odpověď na tuto terapii a pouze tři pacienti měli úplnou odpověď. Domníváme se, že hlavním důvodem je to, že mnoho z T buněk reagovalo s EBV proteiny, které nebyly na nádorových buňkách, a druhým je, že infúzní T buňky nemají dostatek prostoru k růstu.

Dva proteiny EBV přítomné na nádorových buňkách NPC, které jsou dobrými cíli pro terapie T-buněk, se nazývají LMP1 a LMP2. Plánujeme proto generovat T buňky specifické pro LMP1 a LMP2 a tyto buňky infundovat pacientům s NPC. Abychom vyrobili LMP1- a LMP2-CTL, získali jsme krev od pacientů a vypěstovali speciální typ buněk nazývaných dendritické buňky (DC) a lymfoblastoidní buňky infikované EBV (LCL). Poté jsme přenesli adenovirový vektor, který nese geny LMP1 a LMP2 do DC a LCL. Tyto DC a LCL jsou poté ošetřeny zářením, takže nemohou růst a používají se ke stimulaci a expanzi LMP1- a LMP2-CTL. Tato stimulace trénuje T buňky k zabíjení rakovinných buněk s LMP1 a LMP2 na jejich povrchu.

K „vytvoření prostoru“ pro růst EBV-CTL po infuzi u pacientů s NPC jsme již použili speciální protein nazývaný protilátka CD45, který na krátkou dobu odstraní většinu pacientových T buněk. Předběžné výsledky této studie jsou povzbudivé: použití protilátky CD45 je bezpečné a po infuzi jsme pozorovali zvýšený růst EBV-CTL. Kromě toho všichni pacienti s růstem EBV-CTL měli klinické odpovědi.

My a další jsme prokázali proveditelnost CTL terapie pro EBV-pozitivní NPC u imunokompetentních pacientů, čímž jsme poskytli předběžný důkaz protinádorové aktivity EBV-CTL u této populace pacientů. Ne všichni pacienti však reagovali, což naznačuje potřebu dalšího zlepšení. Navrhujeme, že selhání CTL lze překonat zvýšením specifity produktu CTL podaného infuzí. To znamená, že infuze CTL specifických pro LMP1 a LMP2 bude mít větší klinický přínos než EBV-specifické CTL. Odůvodnění tohoto přístupu je přímé: EBV-specifické CTL linie generované standardními metodami jsou ovládány klony T-buněk, které nereagují na subdominantní EBV proteiny LMP1 a LMP2 exprimované v NPC. Také navrhujeme, že neschopnost adoptivně přenesených CTL měřitelně expandovat v periferní krvi pacientů s NPC je důsledkem jak lymfoidní homeostázy u těchto lymfo-repletních pacientů, tak inhibičního infiltrátu T-buněk v místech onemocnění. Budeme proto používat monoklonální protilátky zacílené na CD45 antigen (CD45 MAbs) k lymfodepleti pacientů s NPC před infuzí EBV-specifických CTL. Předběžné výsledky ukazují, že deplece CD45 MAb může zvýšit expanzi CTL a že taková expanze je spojena s vyšší mírou odezvy na onemocnění. Tyto slibné nové údaje potvrdíme a rozšíříme v této fázi I klinické studie.