Untersuchung von LMP1- und LMP2-spezifischen zytotoxischen T-Lymphozyten (CTL) (DELLA)

Während Patienten mit Nasopharynxkarzinom (NPC) durch Chemotherapie und Strahlentherapie geheilt werden können, sind die Aussichten für Patienten, die gegen diese Behandlung resistent sind oder einen Rückfall erleiden, schlecht. Fast alle Patienten mit undifferenziertem Nasopharynxkarzinom haben das EBV-Virus in ihren Tumoren, was ein Angriffspunkt für immuntherapeutische Ansätze sein kann. Wir haben erfolgreich spezialisierte, im Labor gezüchtete Immunsystemzellen eingesetzt und darauf trainiert, EBV-infizierte Zellen (EBV-spezifische zytotoxische T-Lymphozyten [EBV-CTL]) zu erkennen und abzutöten, um eine andere Krebsart namens Posttransplantations-Lymphom zu verhindern und zu behandeln, die danach auftritt Knochenmarktransplantation. Beim Posttransplantations-Lymphom haben die Tumorzellen 9 Proteine, die von EBV hergestellt werden, auf ihrer Oberfläche. Beim Nasopharynxkarzinom, das bei Patienten mit normalem Immunsystem entsteht, exprimieren die Tumorzellen jedoch nur 2 EBV-Proteine, die für das Immunsystem viel schwerer zu erkennen sind. In einer früheren Studie stellten wir EBV-CTL her, die alle 9 Proteine ​​erkannten, und gaben sie Patienten mit NPC. Bei Patienten ohne Nachweis einer aktiven Erkrankung zum Zeitpunkt der Therapie bleibt die Erkrankung in Remission. Bei den Patienten mit aktiver Erkrankung zu dem Zeitpunkt, an dem sie CTL erhielten, sprachen einige Patienten teilweise auf diese Therapie an, und nur drei Patienten sprachen vollständig an. Wir denken, der Hauptgrund dafür ist, dass viele der T-Zellen mit EBV-Proteinen reagierten, die nicht auf den Tumorzellen waren, und der andere, dass die infundierten T-Zellen nicht genug Platz zum Wachsen haben.

Die beiden auf NPC-Tumorzellen vorhandenen EBV-Proteine, die gute Ziele für T-Zell-Therapien sind, heißen LMP1 und LMP2. Wir planen daher, für LMP1 und LMP2 spezifische T-Zellen zu generieren und diese Zellen NPC-Patienten zu infundieren. Um LMP1- und LMP2-CTL herzustellen, haben wir den Patienten Blut entnommen und einen speziellen Zelltyp namens dendritische Zellen (DC) und EBV-infizierte lymphoblastoide Zellen (LCL) gezüchtet. Wir haben dann einen Adenovirus-Vektor, der das LMP1- und LMP2-Gen trägt, in die DC und die LCL transferiert. Diese DC und LCL werden dann mit Strahlung behandelt, damit sie nicht wachsen können, und werden verwendet, um LMP1- und LMP2-CTL zu stimulieren und zu erweitern. Diese Stimulation trainiert die T-Zellen, Krebszellen mit LMP1 und LMP2 auf ihrer Oberfläche abzutöten.

Um nach der Infusion bei NPC-Patienten Platz für das EBV-CTL-Wachstum zu schaffen, haben wir bereits ein spezielles Protein namens CD45-Antikörper verwendet, das für kurze Zeit die meisten T-Zellen des Patienten entfernt. Die vorläufigen Ergebnisse dieser Studie sind ermutigend: Die Verwendung des CD45-Antikörpers ist sicher und wir beobachteten ein verstärktes EBV-CTL-Wachstum nach der Infusion. Darüber hinaus zeigten alle Patienten mit EBV-CTL-Wachstum klinische Reaktionen.

Wir und andere haben die Durchführbarkeit einer CTL-Therapie für EBV-positive NPC bei immunkompetenten Patienten demonstriert und vorläufige Beweise für die Antitumoraktivität von EBV-CTL in dieser Patientenpopulation geliefert. Nicht alle Patienten reagierten jedoch, was darauf hindeutet, dass weitere Verbesserungen erforderlich sind. Wir schlagen vor, dass das CTL-Versagen überwunden werden kann, indem die Spezifität des infundierten CTL-Produkts erhöht wird. Das heißt, die Infusion von CTL, die für LMP1 und LMP2 spezifisch sind, erzeugt einen größeren klinischen Nutzen als EBV-spezifische CTL. Die Begründung für diesen Ansatz ist einfach: EBV-spezifische CTL-Linien, die durch Standardverfahren erzeugt werden, werden von T-Zell-Klonen dominiert, die gegenüber den in NPC exprimierten subdominanten EBV-Proteinen LMP1 und LMP2 nicht reaktiv sind. Wir schlagen auch vor, dass das Versagen von adoptiv übertragenen CTL, sich messbar im peripheren Blut von NPC-Patienten auszudehnen, eine Folge sowohl der lymphoiden Homöostase bei diesen lympho-sättigten Patienten als auch des inhibitorischen T-Zell-Infiltrats an den Krankheitsstellen ist. Wir werden daher monoklonale Antikörper verwenden, die auf das CD45-Antigen (CD45-MAbs) abzielen, um NPC-Patienten vor der Infusion von EBV-spezifischen CTL lymphodepletiert zu werden. Vorläufige Ergebnisse weisen darauf hin, dass die CD45-MAb-Verarmung die CTL-Expansion steigern kann und dass eine solche Expansion mit einer höheren Ansprechrate auf die Krankheit verbunden ist. Wir werden diese vielversprechenden neuen Daten in dieser klinischen Phase-I-Studie bestätigen und erweitern.