Diagnostika tuberkulózní meningitidy pomocí ESAT-6 v CSF

Tuberkulóza je onemocnění, které s sebou nese globální zdravotní zátěž, a tuberkulózní meningitida (TBM) je jedním z nejzávažnějších klinických projevů mimoplicní tuberkulózy. Neschopnost včas rozpoznat a léčit pacienty s TBM umožňuje, aby si toto onemocnění vyžádalo zničující daň po celém světě navzdory dostupnosti účinné chemoterapie. Proto je přesná a včasná identifikace infikovaných jedinců a následné rychlé zahájení účinné antituberkulózní chemoterapie zásadní pro snížení úmrtnosti na TBM.1 Onemocnění je však často obtížné s jistotou diagnostikovat, zejména v časných stádiích2 klinické a mozkomíšní mok (CSF) TBM jsou nespecifické a je třeba je odlišit od velkého množství jiných infekčních meningitid, jako je virová, bakteriální nebo kryptokoková meningitida, které často vedou k diagnostickým nejasnostem. V důsledku toho je TBM často diagnostikována, když již došlo k ireverzibilnímu neurologickému poškození, a proto se doporučuje okamžitá antituberkulózní léčba bez ohledu na výsledky jednotlivých testů, pokud se vážně uvažuje o TBM.

Potvrzení TBM závisí na průkazu Mycobacterium tuberculosis v CSF bakteriologickými metodami. Mikroskopie bacilů se smearovou acidorezistencí je rychlá a levná, má však velmi nízkou citlivost (10–20 %)3 a kultivace rovněž postrádá citlivost a je časově náročná. Ke zlepšení laboratorní diagnostiky TBM byla vyzkoušena řada strategií. Testy amplifikace nukleových kyselin (NAAT) ukazují potenciální roli při potvrzení diagnózy TBM, ale i ony trpí problémem celkové nízké citlivosti (0,46-0,66), částečně kvůli nízké bakteriální zátěži v CSF.4-5 Imunodiagnostické metody byly také hodnoceny, ale heterogenita imunitních odpovědí u pacientů s TBM v různých stádiích infekce představuje hlavní překážku pro detekci mykobakteriálních protilátek ve vzorcích CSF.6-7 Obecně platí, že pacienti v chronických stádiích TBM mají nesčetné množství protilátkových odpovědí na všechny hlavní antigeny Mycobacterium tuberculosis, zatímco pacienti v časných stádiích mají sotva nějakou detekovatelnou protilátkovou odpověď. Interpretace mykobakteriálních protilátek v CSF musí navíc brát v úvahu příspěvek protilátek z plazmy, což ohrožuje použití těchto imunodiagnostických metod na bázi protilátek v místě, kde jsou nejvíce potřeba.7 Jedním z přístupů, jak poskytnout přímý důkaz existující infekce, je detekce přítomnosti specifických antigenů v cirkulujícím CSF. První generace těchto testů využívala nespecifické antigeny, jejichž příkladem je bacily Calmette-Guerin (BCG) nebo purifikovaný proteinový derivát (PPD).8-10 Genomická analýza a těžba antigenu Mycobacterium tuberculosis poskytla nové, specifičtější antigeny, jako je časný sekreční antigenní cíl 6 (ESAT-6), antigen 38 kD a komplex Ag85.11 Diagnostická účinnost tohoto přístupu založeného na antigenech je však stále neuspokojivá.5-6 Mycobacterium tuberculosis patří do skupiny intracelulárních bakterií, které se replikují v klidových makrofázích. Během raných stádií infekce centrálního nervového systému (CNS) jsou tuberkulózní bacily v CSF okamžitě fagocytovány makrofágy,12-13 což vede k nedostatku mykobakteriálních markerů v cirkulujícím CSF. Dosud tedy nebyly dostupné žádné takové testy pro včasnou diagnostiku aktivní TBM s potřebnou senzitivitou a specificitou.

Výzkumníci předpokládali, že na rozdíl od nedostatku mykobakteriálních markerů v cirkulujícím CSF mohou makrofágy v infikovaném CSF nést vysokou zátěž mykobakteriálních antigenů, což by se mohlo hodit k vývoji buněčného diagnostického přístupu pro TBM. Zde se výzkumníci snažili vyvinout imunocytochemickou metodu stěru ke zlepšení přesnosti časné diagnózy TBM vyšetřením časného sekrečního antigenního cíle 6 (ESAT-6), antigenů specifických pro mykobakterie, v makrofázích ve vzorcích CSF od pacientů s TBM a pacientů s infekční meningitidou jinou než TBM. Výzkumníci také porovnávali účinnost tohoto buněčného přístupu pro detekci mykobakteriálních antigenů s mikrobiologickou a NAAT metodou v laboratorní diagnostice TBM. Dále, na základě klinických projevů, CSF a etiologických nálezů v této studii, výzkumníci navrhli nová diagnostická kritéria pro TBM.