Charakteristika endometriální luteální fáze a podpora luteální fáze v protokolech řízené ovariální stimulace s antagonisty GnRH: Zaměření na MicroRNA

MiRNA jsou jednovláknové malé nekódující RNA, které působí na specifické mRNA k regulaci genové exprese. Studie naznačují, že miRNA ovlivňují buněčné aktivity v děloze, včetně buněčné diferenciace a implantace embrya.

V cyklech asistované reprodukce vede řízená ovariální stimulace (COS) k suprafyziologickým hladinám steroidů a je spojena s velmi nízkou koncentrací luteinizačního hormonu během luteální fáze, periimplantačního a implantačního období. Podpora luteální fáze, podávání léků zaměřených na podporu procesu implantace, je na klinikách in vitro fertilizace (IVF) rutinní praxí. Bylo zjištěno, že podpora luteální fáze pomocí steroidního hormonu zlepšuje míru otěhotnění, když byly lidské menopauzální gonadotropiny použity ve spojení s agonisty GnRH pro stimulaci vaječníků a IVF. Zprávy o účinku suplementace steroidy v protokolech antagonistů GnRH jsou omezené.

Navrhovaný projekt je rozšířením naší předchozí studie o charakteristikách endometriální luteální fáze a podpoře luteální fáze v protokolech řízené ovariální hyperstimulace s antagonisty hormonu uvolňujícího gonadotropin. Význam této studie je založen na významu luteální fáze endometria po COS pro proces implantace. Dostupnost dárců oocyktů v programech asistované reprodukce nabízí jedinečnou příležitost studovat vliv různých stimulačních protokolů na kvalitu luteální fáze. Model dárce oocytů nám navíc může umožnit vyhodnotit vliv různých protokolů luteální podpory přímo na preparaci endometria pomocí histologických i biochemických markerů.

Návrh studie: Subjekty studie podstoupily ovariální stimulaci podle protokolu gonadotropin/antagonista GnRH. U všech dárců bylo provedeno základní měření sérových hladin folikuly stimulujícího hormonu (FSH) a estradiolu druhý den jejich menstruačního cyklu. Za předpokladu, že hladiny FSH v séru byly nižší než 10 mIU/ml a hladiny E2 byly nižší než 60 pg/ml, byla ovariální stimulace zahájena rekombinantním FSH. Denní dávka byla upravena podle vývoje folikulů pomocí sériového transvaginálního ultrazvuku a sérové ​​E2 odpovědi. Denní večerní dávka ganirelix acetátu byla zahájena 6. den stimulace a pokračovala přes den podávání lidského choriového gonadotropinu. Když alespoň tři folikuly dosáhly středního průměru 18 mm, byla ovulace spuštěna jedinou dávkou lidského choriového gonadotropinu (hCG). Sonograficky řízený transvaginální odběr oocytů byl proveden 34-36 hodin po podání hCG.

Pro studii bude použito třicet endometriálních biopsií od dárců oocytů v jejich cyklech COS. Subjekty studie byly randomizovány do 4 skupin. Skupina 1: den odběru, neobdržela žádnou podporu luteální fáze, která slouží jako základní linie; grp2: 3, 5 a 10 dní po odběru bez podpory luteální fáze, která slouží jako kontrola; grp3: 3, 5 a 10 dnů po odběru podpora luteální fáze progesteronem ve formě vaginálních čípků počínaje dnem po odběru; grp4: denní perorální dávka 2 mg 17β-estradiolu navíc k mikronizovanému progesteronu. Ihned po biopsii endometria byly všechny vzorky uloženy v nádržích s tekutým dusíkem při -196 °C.

Celková RNA bude izolována a microarray bude proveden pomocí Illumina miRNA expresního panelu. Výsledky pole budou sestaveny a analyzovány se zaměřením na následující aspekty: cílové geny prominentních miRNA, profil miRNA ve vztahu k cílovým genovým drahám; profil exprese miRNA ve vztahu k datování a stavu endometria; vliv podpory luteální fáze na expresi miRNA po stimulaci vaječníků. Pro účely statistické analýzy budou pro každý vzorek použity minimálně 3 miRNA čipy. Pro všechny vzorky ze všech skupin bude potřeba celkem 30 polí.

V této studii si výzkumníci kladou tři otázky: 1) Kolik a jaké typy miRNA jsou v endometriu během ovariální stimulace? Jde o identifikaci miRNA a souvisejících cílových genů, které jsou relevantní pro receptivitu endometria; 2) Mění se úrovně exprese miRNA během luteální fáze nebo během okna implantace? Cílem je prozkoumat dynamiku miRNA, které jsou spojeny s procesem remodelace endometria; a 3) Změní luteální fáze expresi miRNA v luteální fázi? Toto je zkoumat účinek steroidů na regulaci miRNA. Výzkumníci předpokládají, že mnoho kritických genů souvisejících s implantací je regulováno miRNA. Toto výzkumné úsilí potenciálně posune naše znalosti o charakteristikách endometria po COS a dopadu suplementace pohlavních steroidů. Celkově by studie měla pomoci lépe porozumět genetické kontrole implantace. Dokončení této studie může také poskytnout měřitelné vědecké důkazy a užitečné informace pro řízení cyklů IVF.