Endometrial lutealfasegenskaper och lutealfasstöd i kontrollerade ovariestimuleringsprotokoll med GnRH-antagonister: med fokus på mikroRNA

MiRNA är enkelsträngade små icke-kodande RNA som verkar på specifika mRNA för att reglera genuttrycket. Studier har föreslagit att miRNA påverkar cellulära aktiviteter i livmodern, inklusive celldifferentiering och embryoimplantation.

I assisterade reproduktionscykler resulterar kontrollerad ovariestimulering (COS) i suprafysiologiska steroidnivåer och är förknippad med mycket låg koncentration av luteiniserande hormon under lutealfasen, peri-implantations- och implantationsperioden. Lutealfasstöd, administrering av läkemedel som syftar till att stödja implantationsprocessen, har varit rutinmässigt på in vitro fertiliseringskliniker (IVF). Lutealfasstöd med steroidhormon har visat sig förbättra graviditetsfrekvensen när humana menopausala gonadotropiner användes i kombination med GnRH-agonister för ovariestimulering och IVF. Rapporter om effekten av steroidtillskott i GnRH-antagonistprotokoll är begränsade.

Det föreslagna projektet är en förlängning av vår tidigare studie om egenskaper i endometrial lutealfas och lutealfasstöd i kontrollerade ovariehyperstimuleringsprotokoll med gonadotropinfrisättande hormonantagonister. Betydelsen av denna studie är baserad på betydelsen av endometrie i lutealfas efter COS för implantationsprocessen. Tillgängligheten av oocyktdonatorer i teknologiprogram för assisterad reproduktion erbjuder en unik möjlighet att studera effekterna av olika stimuleringsprotokoll på kvaliteten på lutealfasen. Dessutom kan oocytdonatormodellen tillåta oss att utvärdera effekterna av olika luteala stödprotokoll direkt på endometriepreparatet genom histologiska såväl som biokemiska markörer.

Studiedesign: Studiepersoner genomgick ovariestimulering enligt ett gonadotropin/GnRH-antagonistprotokoll. Alla donatorer hade en baslinjemätning av serumfollikelstimulerande hormon (FSH) och östradiolnivåer den andra dagen av deras menstruationscykler. Förutsatt att serum-FSH-nivåerna var mindre än 10mIU/ml och E2-nivåerna var mindre än 60pg/ml, initierades ovariestimulering med rekombinant FSH. Den dagliga dosen justerades i enlighet med follikelutvecklingen genom seriellt transvaginalt ultraljud och serum E2-svar. En daglig kvällsdos av ganirelixacetat initierades på den sjätte dagen av stimulering och fortsatte under dagen för administrering av humant koriongonadotropin. När minst tre folliklar nådde en medeldiameter på 18 mm, utlöstes ägglossningen med en enkel dos av humant koriongonadotropin (hCG). Sonografiskt guidad transvaginal oocythämtning utfördes 34-36 timmar efter hCG-administreringen.

Trettio endometriebiopsier från oocytdonatorer på deras COS-cykler kommer att användas för studien. Studieämnen har randomiserats i 4 grupper. Grp 1: dag för hämtning, fick inget stöd i lutealfas, vilket fungerar som baslinje; grp2: 3, 5 och 10 dagar efter uttag utan stöd i lutealfas, vilket fungerar som kontroll; grp3: 3, 5 och 10 dagar efter uttag, lutealfasstöd med progesteron i form av vaginala suppositorier från och med dagen efter uttag; grp4: daglig oral dos på 2 mg 17β-östradiol utöver det mikroniserade progesteronet. Omedelbart efter endometriebiopsien förvarades alla prover i tankar med flytande kväve vid -196°C.

Totalt RNA kommer att isoleras och mikroarray kommer att utföras med hjälp av en Illumina miRNA-expressionspanel. Arrayresultat kommer att sammanställas och analyseras med fokus på följande aspekter: målgener för framstående miRNA, miRNA-profil i förhållande till målgenvägar; miRNA uttrycksprofil i relation till endometrial datering och status; effekt av lutealfasstöd på miRNA-uttryck efter ovariestimulering. Minst 3 miRNA-matriser kommer att köras för varje prov för statistisk analys. Totalt 30 arrayer kommer att behövas för alla prover från alla grupper.

I denna studie ställer utredarna tre frågor: 1) Hur många och vilka typer av miRNA finns i endometriet under äggstocksstimulering? Detta för att identifiera miRNA och associerade målgener som är relevanta för endometriummottaglighet; 2) Förändras nivåerna av miRNA-uttryck under lutealfasen eller under implantationsfönstret? Detta är för att undersöka dynamiken hos miRNA som är associerade med ombyggnadsprocessen av endometrium; och 3) Stödjer lutealfasen förändra miRNA-uttrycket i lutealfasen? Detta för att undersöka steroideffekten på miRNA-reglering. Utredarna antar att många kritiska gener relaterade till implantation regleras av miRNA. Denna forskningssatsning kommer potentiellt att främja vår kunskap om endometrial egenskaper efter COS och effekterna av sexsteroidtillskott. Sammantaget borde studien hjälpa till att bättre förstå den genetiska kontrollen av implantation. Slutförandet av denna studie kan också ge mätbara vetenskapliga bevis och användbar information för hanteringen av IVF-cykler.