Características da fase lútea endometrial e suporte da fase lútea em protocolos de estimulação ovariana controlada com antagonistas de GnRH: com foco no microRNA

MiRNAs são pequenos RNAs não codificantes de fita simples que atuam em mRNAs específicos para regular a expressão gênica. Estudos sugeriram que os miRNAs influenciam as atividades celulares no útero, incluindo a diferenciação celular e a implantação do embrião.

Nos ciclos reprodutivos assistidos, a estimulação ovariana controlada (COS) resulta em níveis suprafisiológicos de esteróides e está associada a uma concentração muito baixa de hormônio luteinizante durante a fase lútea, peri-implantação e período de implantação. O suporte da fase lútea, administração de medicamentos destinados a apoiar o processo de implantação, tem sido uma prática rotineira nas clínicas de fertilização in vitro (FIV). Verificou-se que o suporte da fase lútea com hormônio esteróide melhora as taxas de gravidez quando as gonadotrofinas menopáusicas humanas são usadas em conjunto com agonistas de GnRH para estimulação ovariana e fertilização in vitro. Relatos sobre o efeito da suplementação de esteróides em protocolos de antagonistas de GnRH são limitados.

O projeto proposto é uma extensão de nosso estudo anterior sobre as características da fase lútea endometrial e o suporte da fase lútea em protocolos de hiperestimulação ovariana controlada com antagonistas do hormônio liberador de gonadotropina. A importância deste estudo baseia-se na importância da fase lútea endometrial após COS para o processo de implantação. A disponibilidade de doadoras de oócitos em programas de tecnologia de reprodução assistida oferece uma oportunidade única para estudar o impacto de diferentes protocolos de estimulação na qualidade da fase lútea. Além disso, o modelo de doadora de oócitos pode nos permitir avaliar o impacto de diferentes protocolos de suporte lúteo diretamente no preparo endometrial por marcadores histológicos e bioquímicos.

Desenho do estudo: As participantes do estudo foram submetidas à estimulação ovariana de acordo com um protocolo de antagonista de gonadotrofina/GnRH. Todas as doadoras tiveram uma medição basal dos níveis séricos de hormônio folículo estimulante (FSH) e estradiol no segundo dia de seus ciclos menstruais. Desde que os níveis séricos de FSH fossem inferiores a 10mIU/ml e os níveis de E2 fossem inferiores a 60pg/ml, a estimulação ovariana foi iniciada com FSH recombinante. A dose diária foi ajustada de acordo com o desenvolvimento folicular por ultrassonografia transvaginal seriada e resposta sérica E2. Uma dose noturna diária de acetato de ganirelix foi iniciada no 6º dia de estimulação e continuou até o dia da administração de gonadotrofina coriônica humana. Quando pelo menos três folículos atingiram um diâmetro médio de 18 mm, a ovulação foi desencadeada com uma dose única de gonadotrofina coriônica humana (hCG). A coleta transvaginal de oócitos guiada por ultrassonografia foi realizada 34-36 horas após a administração de hCG.

Trinta biópsias endometriais de doadoras de oócitos em seus ciclos de COS serão utilizadas para o estudo. Os sujeitos do estudo foram randomizados em 4 grupos. Grp 1: dia da recuperação, não recebeu nenhum suporte da fase lútea, que serve como linha de base; grp2: 3, 5 e 10 dias após a recuperação sem suporte da fase lútea, que serve como controle; grp3: 3, 5 e 10 dias após a extração, suporte da fase lútea com progesterona na forma de supositórios vaginais a partir do dia seguinte à extração; grp4: dose oral diária de 2 mg de 17β-estradiol em adição à progesterona micronizada. Imediatamente após a biópsia endometrial, todos os espécimes foram armazenados em tanques de nitrogênio líquido a -196°C.

O RNA total será isolado e o microarray será realizado usando um painel de expressão de miRNA Illumina. Os resultados dos arranjos serão compilados e analisados ​​com foco nos seguintes aspectos: os genes alvo de miRNAs proeminentes, perfil de miRNA em relação às vias gênicas alvo; perfil de expressão de miRNA em relação à datação e status endometrial; efeito do suporte de fase lútea na expressão de miRNA após estimulação ovariana. Mínimo de 3 arranjos de miRNA serão executados para cada amostra para fins de análise estatística. Um total de 30 matrizes será necessário para todas as amostras de todos os grupos.

Neste estudo, os pesquisadores colocam três questões: 1) Quantos e quais tipos de miRNAs estão no endométrio durante a estimulação ovariana? Isso é para identificar miRNAs e genes-alvo associados que são relevantes para a receptividade do endométrio; 2) Os níveis de expressão de miRNA mudam durante a fase lútea ou durante a janela de implantação? Isso é para examinar a dinâmica dos miRNAs que estão associados ao processo de remodelação do endométrio; e 3) O suporte da fase lútea altera a expressão de miRNA na fase lútea? Isso é para investigar o efeito do esteróide na regulação do miRNA. Os pesquisadores levantam a hipótese de que muitos genes críticos relacionados à implantação são regulados por miRNAs. Este esforço de pesquisa aumentará potencialmente nosso conhecimento das características endometriais após COS e o impacto da suplementação de esteróides sexuais. No geral, o estudo deve ajudar a entender melhor o controle genético da implantação. A conclusão deste estudo também pode fornecer evidências científicas mensuráveis ​​e informações úteis para o gerenciamento dos ciclos de fertilização in vitro.