Endometriale luteale fase-kenmerken en luteale fase-ondersteuning in gecontroleerde ovariële stimulatieprotocollen met GnRH-antagonisten: gericht op microRNA

MiRNA's zijn enkelstrengige kleine niet-coderende RNA's die inwerken op specifieke mRNA's om de genexpressie te reguleren. Studies hebben gesuggereerd dat miRNA's cellulaire activiteiten in de baarmoeder beïnvloeden, waaronder celdifferentiatie en embryo-implantatie.

In geassisteerde voortplantingscycli resulteert gecontroleerde ovariële stimulatie (COS) in suprafysiologische steroïdenspiegels en wordt geassocieerd met een zeer lage luteïniserend hormoonconcentratie tijdens de luteale fase, de peri-implantatie- en implantatieperiode. Ondersteuning van de luteale fase, het toedienen van medicatie ter ondersteuning van het implantatieproces, is een routinepraktijk in klinieken voor in-vitrofertilisatie (IVF). Het is gebleken dat ondersteuning van de luteale fase met steroïde hormoon de zwangerschapspercentages verbetert wanneer gonadotropines uit de menopauze werden gebruikt in combinatie met GnRH-agonisten voor ovariële stimulatie en IVF. Rapporten over het effect van steroïdensuppletie in GnRH-antagonistprotocollen zijn beperkt.

Het voorgestelde project is een uitbreiding van onze eerdere studie over endometriale luteale fase-kenmerken en luteale fase-ondersteuning in gecontroleerde ovariële hyperstimulatieprotocollen met gonadotropine-afgevende hormoonantagonisten. De betekenis van deze studie is gebaseerd op het belang van endometrium in de luteale fase na COS voor het implantatieproces. De beschikbaarheid van eiceldonoren in programma's voor geassisteerde voortplantingstechnologie biedt een unieke gelegenheid om de impact van verschillende stimulatieprotocollen op de kwaliteit van de luteale fase te bestuderen. Bovendien kan het eiceldonormodel ons in staat stellen om de impact van verschillende luteale ondersteuningsprotocollen rechtstreeks op de endometriumpreparatie te evalueren door middel van zowel histologische als biochemische markers.

Studieopzet: proefpersonen ondergingen ovariële stimulatie volgens een gonadotropine/GnRH-antagonistprotocol. Alle donoren hadden een nulmeting van serumfollikelstimulerend hormoon (FSH) en oestradiolspiegels op de tweede dag van hun menstruatiecyclus. Op voorwaarde dat de serum-FSH-spiegels lager waren dan 10 mIU/ml en de E2-spiegels lager waren dan 60 pg/ml, werd ovariële stimulatie gestart met recombinant FSH. De dagelijkse dosis werd aangepast aan de ontwikkeling van de follikels door middel van seriële transvaginale echografie en serum E2-respons. Een dagelijkse avonddosis ganirelix-acetaat werd gestart op de 6e dag van stimulatie en werd voortgezet tot en met de dag van toediening van humaan choriongonadotrofine. Wanneer ten minste drie follikels een gemiddelde diameter van 18 mm bereikten, werd de ovulatie op gang gebracht met een enkele dosis humaan choriongonadotrofine (hCG). Echografisch geleide transvaginale eicelpunctie werd 34-36 uur na de hCG-toediening uitgevoerd.

Dertig endometriumbiopten van eiceldonoren tijdens hun COS-cycli zullen voor de studie worden gebruikt. Studieonderwerpen zijn gerandomiseerd in 4 groepen. Grp 1: dag van ophalen, kreeg geen ondersteuning in de luteale fase, die dient als basislijn; grp2: 3, 5 en 10 dagen na het ophalen zonder ondersteuning van de luteale fase, die dient als controle; grp3: 3, 5 en 10 dagen na het ophalen, luteale fase ondersteuning met progesteron in de vorm van vaginale zetpillen vanaf de dag na het ophalen; grp4: dagelijkse orale dosis van 2 mg 17β-oestradiol naast het gemicroniseerde progesteron. Onmiddellijk na de endometriumbiopsie werden alle monsters opgeslagen in tanks met vloeibare stikstof bij -196°C.

Totaal RNA zal worden geïsoleerd en microarray zal worden uitgevoerd met behulp van een Illumina miRNA-expressiepaneel. Array-resultaten zullen worden samengesteld en geanalyseerd met de nadruk op de volgende aspecten: de doelwitgenen van prominente miRNA's, miRNA-profiel in relatie tot doelwitgenroutes; miRNA-expressieprofiel in relatie tot datering en status van endometrium; effect van luteale fase-ondersteuning op miRNA-expressie na ovariële stimulatie. Voor elk monster worden minimaal 3 miRNA-arrays uitgevoerd voor statistische analyse. Er zijn in totaal 30 arrays nodig voor alle monsters van alle groepen.

In deze studie stellen de onderzoekers drie vragen: 1) Hoeveel en welke soorten miRNA's bevinden zich in het endometrium tijdens ovariële stimulatie? Dit is om miRNA's en bijbehorende doelgenen te identificeren die relevant zijn voor de ontvankelijkheid van het endometrium; 2) Veranderen niveaus van miRNA-expressie tijdens de luteale fase of tijdens het implantatievenster? Dit is om de dynamiek van miRNA's te onderzoeken die geassocieerd zijn met het hermodelleringsproces van endometrium; en 3) Verandert ondersteuning in de luteale fase de miRNA-expressie in de luteale fase? Dit is om het effect van steroïden op de regulatie van miRNA te onderzoeken. De onderzoekers veronderstellen dat veel kritische genen die verband houden met implantatie worden gereguleerd door miRNA's. Deze onderzoeksinspanning zal mogelijk onze kennis van endometriumkenmerken na COS en de impact van suppletie met geslachtshormonen vergroten. Over het algemeen zou de studie moeten helpen de genetische controle van implantatie beter te begrijpen. Voltooiing van deze studie kan ook meetbaar wetenschappelijk bewijs en nuttige informatie opleveren voor het beheer van IVF-cycli.