Merkmale der Lutealphase des Endometriums und Unterstützung der Lutealphase in Protokollen zur kontrollierten Stimulation der Eierstöcke mit GnRH-Antagonisten: Schwerpunkt auf MicroRNA

MiRNAs sind einzelsträngige kleine nichtkodierende RNAs, die auf bestimmte mRNAs einwirken, um die Genexpression zu regulieren. Studien haben gezeigt, dass miRNAs zelluläre Aktivitäten in der Gebärmutter beeinflussen, einschließlich der Zelldifferenzierung und der Embryonenimplantation.

In assistierten Reproduktionszyklen führt die kontrollierte Stimulation der Eierstöcke (COS) zu supraphysiologischen Steroidspiegeln und ist mit einer sehr niedrigen Konzentration des luteinisierenden Hormons während der Lutealphase, der Periimplantation und der Implantationsperiode verbunden. Die Unterstützung der Lutealphase, die Verabreichung von Medikamenten zur Unterstützung des Implantationsprozesses, gehört in Kliniken für In-vitro-Fertilisation (IVF) zur Routinepraxis. Es wurde festgestellt, dass die Unterstützung der Lutealphase mit Steroidhormonen die Schwangerschaftsraten verbessert, wenn menschliche Gonadotropine in den Wechseljahren in Verbindung mit GnRH-Agonisten zur Stimulation der Eierstöcke und zur IVF verwendet werden. Es gibt nur begrenzte Berichte über die Wirkung einer Steroidergänzung in GnRH-Antagonisten-Protokollen.

Das vorgeschlagene Projekt ist eine Erweiterung unserer vorherigen Studie zu den Eigenschaften der endometrialen Lutealphase und zur Unterstützung der Lutealphase bei kontrollierten ovariellen Hyperstimulationsprotokollen mit Gonadotropin-Releasing-Hormon-Antagonisten. Die Bedeutung dieser Studie basiert auf der Bedeutung des Endometriums in der Lutealphase nach COS für den Implantationsprozess. Die Verfügbarkeit von Eizellenspendern in Programmen zur assistierten Reproduktionstechnologie bietet eine einzigartige Gelegenheit, den Einfluss verschiedener Stimulationsprotokolle auf die Qualität der Lutealphase zu untersuchen. Darüber hinaus kann uns das Eizellenspendermodell ermöglichen, den Einfluss verschiedener Protokolle zur Gelbkörperunterstützung direkt auf die Endometriumpräparation anhand histologischer und biochemischer Marker zu bewerten.

Studiendesign: Die Probanden wurden einer Stimulation der Eierstöcke gemäß einem Gonadotropin/GnRH-Antagonisten-Protokoll unterzogen. Bei allen Spendern wurde am zweiten Tag ihres Menstruationszyklus eine Grundmessung des follikelstimulierenden Hormons (FSH) und Östradiolspiegels im Serum durchgeführt. Sofern die Serum-FSH-Spiegel weniger als 10 mIU/ml und die E2-Spiegel weniger als 60 pg/ml betrugen, wurde die Stimulation der Eierstöcke mit rekombinantem FSH eingeleitet. Die Tagesdosis wurde entsprechend der Follikelentwicklung durch serielle transvaginale Ultraschalluntersuchung und Serum-E2-Reaktion angepasst. Eine tägliche Abenddosis Ganirelixacetat wurde am 6. Tag der Stimulation begonnen und bis zum Tag der Verabreichung von humanem Choriongonadotropin fortgesetzt. Wenn mindestens drei Follikel einen mittleren Durchmesser von 18 mm erreichten, wurde der Eisprung mit einer Einzeldosis humanem Choriongonadotropin (hCG) ausgelöst. Die sonographisch gesteuerte transvaginale Eizellentnahme erfolgte 34–36 Stunden nach der hCG-Gabe.

Für die Studie werden 30 Endometriumbiopsien von Eizellenspenderinnen während ihres COS-Zyklus verwendet. Die Studienteilnehmer wurden in 4 Gruppen randomisiert. Grp 1: Tag der Entnahme, erhielt keine Unterstützung in der Lutealphase, die als Basislinie dient; grp2: 3, 5 und 10 Tage nach der Entnahme ohne Unterstützung der Lutealphase, die als Kontrolle dient; grp3: 3, 5 und 10 Tage nach der Entnahme, Lutealphasenunterstützung mit Progesteron in Form von Vaginalzäpfchen ab dem Tag nach der Entnahme; grp4: tägliche orale Dosis von 2 mg 17β-Östradiol zusätzlich zum mikronisierten Progesteron. Unmittelbar nach der Endometriumbiopsie wurden alle Proben in Tanks mit flüssigem Stickstoff bei -196 °C gelagert.

Die Gesamt-RNA wird isoliert und ein Microarray wird unter Verwendung eines Illumina miRNA-Expressionspanels durchgeführt. Die Array-Ergebnisse werden zusammengestellt und analysiert, wobei der Schwerpunkt auf den folgenden Aspekten liegt: den Zielgenen prominenter miRNAs, dem miRNA-Profil in Bezug auf Zielgenpfade; miRNA-Expressionsprofil in Bezug auf Datierung und Status des Endometriums; Wirkung der Unterstützung der Lutealphase auf die miRNA-Expression nach Stimulation der Eierstöcke. Zum Zwecke der statistischen Analyse werden für jede Probe mindestens 3 miRNA-Arrays ausgeführt. Für alle Proben aller Gruppen werden insgesamt 30 Arrays benötigt.

In dieser Studie stellen die Forscher drei Fragen: 1) Wie viele und welche Arten von miRNAs befinden sich während der Stimulation der Eierstöcke im Endometrium? Dabei geht es darum, miRNAs und zugehörige Zielgene zu identifizieren, die für die Empfänglichkeit des Endometriums relevant sind; 2) Ändern sich die miRNA-Expressionsniveaus während der Lutealphase oder während des Implantationsfensters? Ziel ist es, die Dynamik von miRNAs zu untersuchen, die mit dem Umbauprozess des Endometriums verbunden sind. und 3) Verändert die Unterstützung der Lutealphase die miRNA-Expression in der Lutealphase? Damit soll der Steroideffekt auf die miRNA-Regulation untersucht werden. Die Forscher gehen davon aus, dass viele kritische Gene im Zusammenhang mit der Implantation durch miRNAs reguliert werden. Diese Forschungsanstrengungen werden möglicherweise unser Wissen über die Eigenschaften des Endometriums nach COS und die Auswirkungen einer Sexualsteroid-Supplementierung erweitern. Insgesamt soll die Studie dazu beitragen, die genetische Kontrolle der Implantation besser zu verstehen. Der Abschluss dieser Studie könnte auch messbare wissenschaftliche Beweise und nützliche Informationen für das Management von IVF-Zyklen liefern.