Características de la fase lútea endometrial y soporte de la fase lútea en protocolos de estimulación ovárica controlada con antagonistas de GnRH: enfoque en microARN

Los miARN son pequeños ARN no codificantes monocatenarios que actúan sobre ARNm específicos para regular la expresión génica. Los estudios han sugerido que los miARN influyen en las actividades celulares del útero, incluida la diferenciación celular y la implantación del embrión.

En los ciclos de reproducción asistida, la estimulación ovárica controlada (COS) da como resultado niveles de esteroides suprafisiológicos y se asocia con una concentración de hormona luteinizante muy baja durante la fase lútea, el período de periimplantación e implantación. El soporte de la fase lútea, la administración de medicamentos destinados a apoyar el proceso de implantación, ha sido una práctica habitual en las clínicas de fertilización in vitro (FIV). Se ha descubierto que el apoyo de la fase lútea con hormona esteroide mejora las tasas de embarazo cuando se usan gonadotropinas menopáusicas humanas junto con agonistas de GnRH para la estimulación ovárica y la FIV. Los informes sobre el efecto de la suplementación con esteroides en los protocolos de antagonistas de GnRH son limitados.

El proyecto propuesto es una extensión de nuestro estudio anterior sobre las características de la fase lútea endometrial y el soporte de la fase lútea en protocolos de hiperestimulación ovárica controlada con antagonistas de la hormona liberadora de gonadotropina. La importancia de este estudio se basa en la importancia de la fase lútea endometrial después de COS para el proceso de implantación. La disponibilidad de donantes de ovocitos en programas de tecnología de reproducción asistida ofrece una oportunidad única para estudiar el impacto de diferentes protocolos de estimulación en la calidad de la fase lútea. Además, el modelo de donante de ovocitos puede permitirnos evaluar el impacto de diferentes protocolos de soporte luteal directamente en la preparación endometrial mediante marcadores histológicos y bioquímicos.

Diseño del estudio: Los sujetos del estudio se sometieron a estimulación ovárica de acuerdo con un protocolo de antagonista de gonadotropina/GnRH. A todas las donantes se les midió la línea de base de la hormona foliculoestimulante (FSH) sérica y los niveles de estradiol en el segundo día de sus ciclos menstruales. Siempre que los niveles de FSH en suero fueran inferiores a 10 mUI/ml y los niveles de E2 fueran inferiores a 60 pg/ml, se inició la estimulación ovárica con FSH recombinante. La dosis diaria se ajustó de acuerdo con el desarrollo folicular mediante ecografía transvaginal seriada y respuesta sérica de E2. Se inició una dosis nocturna diaria de acetato de ganirelix el sexto día de estimulación y se continuó durante el día de la administración de gonadotropina coriónica humana. Cuando al menos tres folículos alcanzaron un diámetro medio de 18 mm, se desencadenó la ovulación con una dosis única de gonadotropina coriónica humana (hCG). La recuperación de ovocitos transvaginal guiada ecográficamente se realizó 34-36 horas después de la administración de hCG.

Para el estudio se utilizarán treinta biopsias endometriales de donantes de ovocitos en sus ciclos de COS. Los sujetos del estudio se han aleatorizado en 4 grupos. Grp 1: día de la recuperación, no recibió ningún apoyo de la fase lútea, que sirve como línea de base; grp2: 3, 5 y 10 días después de la recuperación sin soporte de fase lútea, que sirve como control; grp3: 3, 5 y 10 días después de la recuperación, soporte de la fase lútea con progesterona en forma de óvulos vaginales a partir del día después de la recuperación; grp4: dosis oral diaria de 2 mg de 17β-estradiol además de la progesterona micronizada. Inmediatamente después de la biopsia endometrial, todas las muestras se almacenaron en tanques de nitrógeno líquido a -196 °C.

El ARN total se aislará y la micromatriz se realizará mediante un panel de expresión de miARN de Illumina. Los resultados de la matriz se compilarán y analizarán centrándose en los siguientes aspectos: los genes diana de los miARN destacados, el perfil de miARN en relación con las vías de los genes diana; perfil de expresión de miARN en relación con la datación y el estado del endometrio; efecto del soporte de la fase lútea en la expresión de miARN después de la estimulación ovárica. Se ejecutarán un mínimo de 3 matrices de miARN para cada muestra con fines de análisis estadístico. Se necesitará un total de 30 arreglos para todas las muestras de todos los grupos.

En este estudio, los investigadores plantean tres preguntas: 1) ¿Cuántos y qué tipos de miARN hay en el endometrio durante la estimulación ovárica? Esto es para identificar miRNAs y genes diana asociados que son relevantes para la receptividad del endometrio; 2) ¿Cambian los niveles de expresión de miARN durante la fase lútea o durante la ventana de implantación? Esto es para examinar la dinámica de los miARN que están asociados con el proceso de remodelación del endometrio; y 3) ¿El soporte de la fase lútea altera la expresión de miARN en la fase lútea? Esto es para investigar el efecto de los esteroides en la regulación de miARN. Los investigadores plantean la hipótesis de que muchos genes críticos relacionados con la implantación están regulados por miARN. Este esfuerzo de investigación aumentará potencialmente nuestro conocimiento de las características del endometrio después de COS y el impacto de la suplementación con esteroides sexuales. En general, el estudio debería ayudar a comprender mejor el control genético de la implantación. La finalización de este estudio también puede proporcionar evidencia científica medible e información útil para el manejo de los ciclos de FIV.