Charakterystyka fazy lutealnej endometrium i wspomaganie fazy lutealnej w protokołach kontrolowanej stymulacji jajników z antagonistami GnRH: skupienie się na mikroRNA

MiRNA to jednoniciowe małe niekodujące RNA, które działają na określone mRNA w celu regulacji ekspresji genów. Badania sugerują, że miRNA wpływają na aktywność komórkową w macicy, w tym na różnicowanie komórek i implantację zarodka.

W cyklach wspomaganego rozrodu, kontrolowana stymulacja jajników (COS) powoduje ponadfizjologiczne poziomy steroidów i wiąże się z bardzo niskim stężeniem hormonu luteinizującego w fazie lutealnej, w okresie okołoimplantacyjnym i implantacyjnym. Wspomaganie fazy lutealnej, podawanie leków mających na celu wspomaganie procesu implantacji, jest rutynową praktyką w klinikach zajmujących się zapłodnieniem pozaustrojowym (IVF). Stwierdzono, że wspomaganie fazy lutealnej hormonem steroidowym poprawia wskaźniki ciąż, gdy ludzkie gonadotropiny menopauzalne były stosowane w połączeniu z agonistami GnRH do stymulacji jajników i zapłodnienia in vitro. Doniesienia na temat wpływu suplementacji sterydami w protokołach antagonistów GnRH są ograniczone.

Proponowany projekt jest rozszerzeniem naszego poprzedniego badania dotyczącego charakterystyki fazy lutealnej endometrium i wspomagania fazy lutealnej w kontrolowanych protokołach hiperstymulacji jajników z antagonistami hormonu uwalniającego gonadotropinę. Znaczenie tego badania opiera się na znaczeniu endometrium fazy lutealnej po COS dla procesu implantacji. Dostępność dawców oocytów w programach technologii wspomaganego rozrodu stwarza wyjątkową okazję do badania wpływu różnych protokołów stymulacji na jakość fazy lutealnej. Ponadto model dawcy oocytów może pozwolić nam ocenić wpływ różnych protokołów wsparcia lutealnego bezpośrednio na preparat endometrium za pomocą markerów histologicznych i biochemicznych.

Projekt badania: Badane pacjentki poddano stymulacji jajników zgodnie z protokołem gonadotropina/antagonista GnRH. Wszyscy dawcy mieli podstawowy pomiar poziomu hormonu folikulotropowego (FSH) i estradiolu w surowicy w drugim dniu ich cykli menstruacyjnych. Pod warunkiem, że poziomy FSH w surowicy były mniejsze niż 10 mIU/ml, a poziomy E2 były mniejsze niż 60 pg/ml, rozpoczęto stymulację jajników rekombinowanym FSH. Dzienną dawkę dostosowano w zależności od rozwoju pęcherzyków za pomocą seryjnego USG przezpochwowego i odpowiedzi E2 w surowicy. Codzienną wieczorną dawkę octanu ganireliksu rozpoczęto szóstego dnia stymulacji i kontynuowano przez cały dzień podawania ludzkiej gonadotropiny kosmówkowej. Kiedy co najmniej trzy pęcherzyki osiągnęły średnią średnicę 18 mm, owulację wyzwalano pojedynczą dawką ludzkiej gonadotropiny kosmówkowej (hCG). Przezpochwowe pobranie oocytów pod kontrolą USG przeprowadzono 34-36 godzin po podaniu hCG.

Do badania zostanie wykorzystanych trzydzieści biopsji endometrium od dawczyń oocytów w ich cyklach COS. Osoby badane zostały losowo podzielone na 4 grupy. Grp 1: dzień pobrania, nie otrzymał żadnego wsparcia fazy lutealnej, która służy jako linia podstawowa; grp2: 3, 5 i 10 dni po odzyskaniu bez wspomagania fazy lutealnej, która służy jako kontrola; grp3: 3, 5 i 10 dni po pobraniu, wspomaganie fazy lutealnej progesteronem w postaci czopków dopochwowych począwszy od dnia po pobraniu; grp4: dzienna dawka doustna 2 mg 17β-estradiolu oprócz mikronizowanego progesteronu. Bezpośrednio po biopsji endometrium wszystkie próbki przechowywano w zbiornikach z ciekłym azotem w temperaturze -196°C.

Całkowity RNA zostanie wyizolowany, a mikromacierze zostaną wykonane przy użyciu panelu ekspresyjnego miRNA firmy Illumina. Wyniki badań zostaną skompilowane i przeanalizowane, koncentrując się na następujących aspektach: docelowe geny najważniejszych miRNA, profil miRNA w odniesieniu do docelowych szlaków genowych; profil ekspresji miRNA w odniesieniu do datowania i stanu endometrium; wpływ wsparcia fazy lutealnej na ekspresję miRNA po stymulacji jajników. Dla każdej próbki zostaną uruchomione co najmniej 3 macierze miRNA do celów analizy statystycznej. W sumie potrzebnych będzie 30 macierzy dla wszystkich próbek ze wszystkich grup.

W tym badaniu badacze stawiają trzy pytania: 1) Ile i jakie rodzaje miRNA znajdują się w endometrium podczas stymulacji jajników? Ma to na celu zidentyfikowanie miRNA i powiązanych genów docelowych, które są istotne dla receptywności endometrium; 2) Czy poziom ekspresji miRNA zmienia się w fazie lutealnej lub w oknie implantacji? Ma to na celu zbadanie dynamiki miRNA, które są związane z procesem przebudowy endometrium; oraz 3) Czy wsparcie fazy lutealnej zmienia ekspresję miRNA w fazie lutealnej? Ma to na celu zbadanie wpływu steroidów na regulację miRNA. Badacze stawiają hipotezę, że wiele krytycznych genów związanych z implantacją jest regulowanych przez miRNA. Ten wysiłek badawczy potencjalnie poszerzy naszą wiedzę na temat cech endometrium po COS i wpływu suplementacji sterydami płciowymi. Ogólnie badanie powinno pomóc w lepszym zrozumieniu genetycznej kontroli implantacji. Zakończenie tego badania może również dostarczyć wymiernych dowodów naukowych i przydatnych informacji do zarządzania cyklami IVF.