Характеристики лютеиновой фазы эндометрия и поддержка лютеиновой фазы в протоколах контролируемой стимуляции яичников с помощью антагонистов ГнРГ: фокус на микроРНК

МикроРНК представляют собой одноцепочечные малые некодирующие РНК, которые действуют на специфические мРНК, регулируя экспрессию генов. Исследования показали, что miRNAs влияют на клеточную активность в матке, включая дифференцировку клеток и имплантацию эмбриона.

Во вспомогательных репродуктивных циклах контролируемая стимуляция яичников (COS) приводит к супрафизиологическим уровням стероидов и связана с очень низкой концентрацией лютеинизирующего гормона во время лютеиновой фазы, периимплантационного и имплантационного периодов. Поддержка лютеиновой фазы, введение лекарств, направленных на поддержку процесса имплантации, является обычной практикой в ​​клиниках экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). Было обнаружено, что поддержка лютеиновой фазы стероидными гормонами улучшает частоту наступления беременности, когда человеческие менопаузальные гонадотропины использовались в сочетании с агонистами ГнРГ для стимуляции яичников и ЭКО. Сообщения о влиянии добавок стероидов в протоколы антагонистов ГнРГ ограничены.

Предлагаемый проект является продолжением нашего предыдущего исследования характеристик лютеиновой фазы эндометрия и поддержки лютеиновой фазы в протоколах контролируемой гиперстимуляции яичников с помощью антагонистов гонадотропин-высвобождающего гормона. Значение этого исследования основано на важности лютеиновой фазы эндометрия после COS для процесса имплантации. Наличие доноров ооцитов в программах вспомогательных репродуктивных технологий дает уникальную возможность изучить влияние различных протоколов стимуляции на качество лютеиновой фазы. Кроме того, модель донора ооцитов может позволить нам оценить влияние различных протоколов поддержки лютеиновой кислоты непосредственно на препарат эндометрия с помощью гистологических, а также биохимических маркеров.

Дизайн исследования: Субъектам исследования проводилась стимуляция яичников в соответствии с протоколом гонадотропина/антагониста ГнРГ. У всех доноров исходно измеряли уровни фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) и эстрадиола в сыворотке крови на второй день менструального цикла. При условии, что уровни ФСГ в сыворотке были менее 10 мМЕ/мл и уровни Е2 были менее 60 пг/мл, стимуляция яичников начиналась с рекомбинантного ФСГ. Суточная доза корректировалась в соответствии с развитием фолликулов с помощью серии трансвагинальных ультразвуковых исследований и ответа на E2 в сыворотке. Ежедневная вечерняя доза ганиреликса ацетата была начата на 6-й день стимуляции и продолжена в течение дня введения хорионического гонадотропина человека. Когда по крайней мере три фолликула достигали среднего диаметра 18 мм, овуляция вызывалась однократной дозой хорионического гонадотропина человека (ХГЧ). Трансвагинальное извлечение ооцитов под контролем УЗИ проводилось через 34-36 часов после введения ХГЧ.

Для исследования будут использованы тридцать биоптатов эндометрия от доноров ооцитов в циклах COS. Субъекты исследования были рандомизированы на 4 группы. Группа 1: день извлечения, не получали никакой поддержки лютеиновой фазы, которая служит исходным уровнем; группа 2: через 3, 5 и 10 дней после извлечения без поддержки лютеиновой фазы, которая служит контролем; grp3: 3, 5 и 10 сутки после извлечения, поддержка лютеиновой фазы прогестероном в виде вагинальных суппозиториев, начиная со дня после извлечения; grp4: суточная пероральная доза 2 мг 17β-эстрадиола в дополнение к микронизированному прогестерону. Сразу после биопсии эндометрия все образцы хранили в резервуарах с жидким азотом при температуре -196°C.

Суммарная РНК будет выделена, и микрочип будет выполнен с использованием панели экспрессии микроРНК Illumina. Результаты массива будут скомпилированы и проанализированы с упором на следующие аспекты: гены-мишени известных микроРНК, профиль микроРНК по отношению к путям генов-мишеней; Профиль экспрессии миРНК в зависимости от датировки и статуса эндометрия; Влияние поддержки лютеиновой фазы на экспрессию микроРНК после стимуляции яичников. Минимум 3 массива микроРНК будут запускаться для каждого образца с целью статистического анализа. Всего потребуется 30 массивов для всех образцов из всех групп.

В этом исследовании исследователи задают три вопроса: 1) Сколько и какие типы микроРНК находятся в эндометрии во время стимуляции яичников? Это должно идентифицировать miRNAs и ассоциированные целевые гены, которые имеют отношение к рецептивности эндометрия; 2) Изменяются ли уровни экспрессии микроРНК во время лютеиновой фазы или во время окна имплантации? Это делается для изучения динамики микроРНК, которые связаны с процессом ремоделирования эндометрия; и 3) Изменяет ли поддержка лютеиновой фазы экспрессию микроРНК в лютеиновой фазе? Это должно исследовать влияние стероидов на регуляцию микроРНК. Исследователи предполагают, что многие важные гены, связанные с имплантацией, регулируются микроРНК. Это исследование потенциально расширит наши знания о характеристиках эндометрия после COS и влиянии добавок половых стероидов. В целом исследование должно помочь лучше понять генетический контроль имплантации. Завершение этого исследования может также предоставить измеримые научные данные и полезную информацию для управления циклами ЭКО.