Endometriumin luteaalivaiheen ominaisuudet ja luteaalivaiheen tuki kontrolloiduissa munasarjojen stimulaatioprotokollassa GnRH-antagonisteilla: keskittyminen mikroRNA:han

MiRNA:t ovat yksijuosteisia pieniä ei-koodaavia RNA:ita, jotka vaikuttavat spesifisiin mRNA:ihin säätelemään geeniekspressiota. Tutkimukset ovat ehdottaneet, että miRNA:t vaikuttavat solujen toimintaan kohdussa, mukaan lukien solujen erilaistuminen ja alkion implantaatio.

Avustetussa lisääntymissykleissä kontrolloitu munasarjojen stimulaatio (COS) johtaa suprafysiologisiin steroiditasoihin ja siihen liittyy erittäin alhainen luteinisoivan hormonin pitoisuus luteaalivaiheen, implantaation peri- ja implantaatiojakson aikana. Luteaalivaiheen tuki eli implantaatioprosessia tukevien lääkkeiden antaminen on ollut rutiinikäytäntö koeputkihedelmöitysklinikoilla (IVF). Luteaalivaiheen tukemisen steroidihormonilla on havaittu parantavan raskauden määrää, kun ihmisen vaihdevuosien gonadotropiineja käytettiin yhdessä GnRH-agonistien kanssa munasarjojen stimulaatioon ja IVF:ään. Raportit steroidilisän vaikutuksesta GnRH-antagonistiprotokollassa ovat rajallisia.

Ehdotettu projekti on jatkoa aikaisemmalle tutkimuksellemme endometriumin luteaalivaiheen ominaisuuksista ja luteaalivaiheen tuesta kontrolloiduissa munasarjojen hyperstimulaatioprotokollissa gonadotropiinia vapauttavan hormonin antagonisteilla. Tämän tutkimuksen merkitys perustuu luteaalivaiheen kohdun limakalvon merkitykseen COS:n jälkeen implantaatioprosessissa. Munasoluluovuttajien saatavuus avusteisissa lisääntymisteknologiaohjelmissa tarjoaa ainutlaatuisen mahdollisuuden tutkia eri stimulaatioprotokollien vaikutusta luteaalivaiheen laatuun. Lisäksi munasolun luovuttajamallin avulla voimme arvioida eri luteaalin tukiprotokollan vaikutusta suoraan kohdun limakalvon preparaatioon histologisten sekä biokemiallisten markkerien avulla.

Tutkimussuunnitelma: Tutkittaville tehtiin munasarjojen stimulaatio gonadotropiini/GnRH-antagonistiprotokollan mukaisesti. Kaikilla luovuttajilla mitattiin seerumin follikkelia stimuloivan hormonin (FSH) ja estradiolipitoisuudet kuukautiskierron toisena päivänä. Edellyttäen, että seerumin FSH-tasot olivat alle 10 mIU/ml ja E2-tasot olivat alle 60 pg/ml, munasarjojen stimulaatio aloitettiin yhdistelmä-FSH:lla. Päivittäinen annos säädettiin follikulaarisen kehityksen mukaan sarjalla transvaginaalisella ultraäänellä ja seerumin E2-vasteella. Päivittäinen ilta-annos ganireliksiasetaattia aloitettiin 6. stimulaatiopäivänä ja sitä jatkettiin ihmisen koriongonadotropiinin antopäivän ajan. Kun vähintään kolmen follikkelin keskimääräinen halkaisija oli 18 mm, ovulaatio laukaistiin yhdellä annoksella ihmisen koriongonadotropiinia (hCG). Sonografisesti ohjattu transvaginaalinen munasolun haku suoritettiin 34-36 tuntia hCG:n annon jälkeen.

Tutkimukseen käytetään kolmekymmentä endometriumin biopsiaa munasolun luovuttajilta heidän COS-syklinsä aikana. Tutkimuskohteet on satunnaistettu 4 ryhmään. Ryhmä 1: hakupäivä, ei saanut mitään luteaalivaiheen tukea, joka toimii perusviivana; grp2: 3, 5 ja 10 päivää talteenoton jälkeen ilman luteaalivaiheen tukea, joka toimii kontrollina; grp3: 3, 5 ja 10 päivää talteenoton jälkeen luteaalivaiheen tukeminen progesteronilla emättimen peräpuikkojen muodossa noudon jälkeisestä päivästä alkaen; grp4: päivittäinen oraalinen annos 2 mg 17β-estradiolia mikronisoidun progesteronin lisäksi. Välittömästi kohdun limakalvon biopsian jälkeen kaikki näytteet säilytettiin nestemäisen typen säiliöissä -196 °C:ssa.

Kokonais-RNA eristetään ja mikrosiru suoritetaan käyttämällä Illumina miRNA -ekspressiopaneelia. Array-tulokset kootaan ja analysoidaan keskittyen seuraaviin näkökohtiin: näkyvien miRNA:iden kohdegeenit, miRNA-profiili suhteessa kohdegeenireitteihin; miRNA-ekspressioprofiili suhteessa kohdun limakalvon päivämäärään ja tilaan; luteaalifaasin tuen vaikutus miRNA-ekspressioon munasarjojen stimulaation jälkeen. Kullekin näytteelle ajetaan vähintään 3 miRNA-järjestelmää tilastollista analyysiä varten. Kaikille näytteille kaikista ryhmistä tarvitaan yhteensä 30 taulukkoa.

Tässä tutkimuksessa tutkijat esittävät kolme kysymystä: 1) Kuinka monta ja minkä tyyppistä miRNA:ta on endometriumissa munasarjojen stimulaation aikana? Tämän tarkoituksena on tunnistaa miRNA:t ja niihin liittyvät kohdegeenit, jotka ovat merkityksellisiä kohdun limakalvon vastaanottavuuden kannalta; 2) Muuttuvatko miRNA:n ilmentymistasot luteaalivaiheen aikana vai implantaatioikkunan aikana? Tämän tarkoituksena on tutkia endometriumin uusiutumisprosessiin liittyvien miRNA:iden dynamiikkaa; ja 3) Muuttaako luteaalifaasin tuki miRNA:n ilmentymistä luteaalivaiheessa? Tämän tarkoituksena on tutkia steroidien vaikutusta miRNA-sääntelyyn. Tutkijat olettavat, että monia kriittisiä implantaatioon liittyviä geenejä säätelevät miRNA:t. Tämä tutkimustyö mahdollisesti edistää tietämysämme kohdun limakalvon ominaisuuksista COS:n jälkeen ja sukupuolisteroidien lisäyksen vaikutuksesta. Kaiken kaikkiaan tutkimuksen pitäisi auttaa ymmärtämään paremmin implantaation geneettistä kontrollia. Tämän tutkimuksen loppuun saattaminen voi myös tarjota mitattavissa olevaa tieteellistä näyttöä ja hyödyllistä tietoa IVF-syklien hallintaan.