Endometrial lutealfasekarakteristikk og lutealfasestøtte i kontrollerte ovariestimuleringsprotokoller med GnRH-antagonister: Fokus på mikroRNA

MiRNA-er er enkelttrådede små ikke-kodende RNA-er som virker på spesifikke mRNA-er for å regulere genuttrykket. Studier har antydet at miRNA påvirker cellulære aktiviteter i livmoren, inkludert celledifferensiering og embryoimplantasjon.

I assisterte reproduksjonssykluser resulterer kontrollert ovariestimulering (COS) i suprafysiologiske steroidnivåer og er assosiert med svært lav konsentrasjon av luteiniserende hormon under lutealfasen, peri-implantasjons- og implantasjonsperioden. Lutealfasestøtte, administrering av medisiner rettet mot å støtte implantasjonsprosessen, har vært en rutinemessig praksis i in vitro fertilisering (IVF) klinikker. Lutealfasestøtte med steroidhormon har vist seg å forbedre graviditetsratene når humane menopausale gonadotropiner ble brukt sammen med GnRH-agonister for eggstokkstimulering og IVF. Rapporter om effekten av steroidtilskudd i GnRH-antagonistprotokoller er begrenset.

Det foreslåtte prosjektet er en utvidelse av vår tidligere studie om Endometrial Luteal Phase Characteristics og Luteal Phase Support i kontrollerte ovariehyperstimuleringsprotokoller med gonadotropinfrigjørende hormonantagonister. Betydningen av denne studien er basert på betydningen av lutealfase endometrial etter COS for implantasjonsprosessen. Tilgjengeligheten av oosyktdonorer i assisterte befruktningsteknologiprogrammer gir en unik mulighet til å studere virkningen av ulike stimuleringsprotokoller på kvaliteten på lutealfasen. I tillegg kan oocyttdonormodellen tillate oss å evaluere virkningen av forskjellige luteale støtteprotokoller direkte på endometrialpreparatet ved hjelp av histologiske så vel som biokjemiske markører.

Studiedesign: Studiepersoner gjennomgikk ovariestimulering i henhold til en gonadotropin/GnRH-antagonistprotokoll. Alle donorer hadde en baseline-måling av serumfollikkelstimulerende hormon (FSH) og østradiolnivåer på den andre dagen av deres menstruasjonssyklus. Forutsatt at serum-FSH-nivåene var mindre enn 10mIU/ml og E2-nivåene var mindre enn 60pg/ml, ble ovariestimulering initiert med rekombinant FSH. Den daglige dosen ble justert i henhold til follikulær utvikling ved seriell transvaginal ultralyd og serum E2-respons. En daglig kveldsdose av ganirelixacetat ble initiert på den 6. stimuleringsdagen og fortsatte gjennom dagen for administrering av humant koriongonadotropin. Når minst tre follikler nådde en gjennomsnittlig diameter på 18 mm, ble eggløsningen utløst med en enkelt dose humant koriongonadotropin (hCG). Sonografisk veiledet transvaginal oocyttinnhenting ble utført 34-36 timer etter hCG-administrasjonen.

Tretti endometriebiopsier fra oocyttdonorer på deres COS-sykluser vil bli brukt til studien. Studieemner har blitt randomisert i 4 grupper. Grp 1: dag for uthenting, mottok ingen lutealfasestøtte, som fungerer som basislinje; grp2: 3, 5 og 10 dager etter uthenting uten lutealfasestøtte, som fungerer som kontroll; grp3: 3, 5 og 10 dager etter uthenting, lutealfasestøtte med progesteron i form av vaginale stikkpiller fra og med dagen etter uthenting; grp4: daglig oral dose på 2 mg 17β-østradiol i tillegg til det mikroniserte progesteronet. Umiddelbart etter endometriebiopsien ble alle prøvene lagret i tanker med flytende nitrogen ved -196 °C.

Totalt RNA vil bli isolert og mikroarray vil bli utført ved hjelp av et Illumina miRNA-ekspresjonspanel. Array-resultater vil bli kompilert og analysert med fokus på følgende aspekter: målgenene til fremtredende miRNAer, miRNA-profil i forhold til målgenveier; miRNA ekspresjonsprofil i forhold til endometrial datering og status; effekt av lutealfasestøtte på miRNA-ekspresjon etter eggstokkstimulering. Minimum 3 miRNA-matriser vil bli kjørt for hver prøve for statistisk analyse. Totalt 30 arrays vil være nødvendig for alle prøver fra alle grupper.

I denne studien stiller etterforskerne tre spørsmål: 1) Hvor mange og hvilke typer miRNA er det i endometriet under ovariestimulering? Dette er for å identifisere miRNA og assosierte målgener som er relevante for endometriummottakelighet; 2) Endres nivåer av miRNA-ekspresjon under lutealfasen, eller under implantasjonsvinduet? Dette er for å undersøke dynamikken til miRNA som er assosiert med remodelleringsprosessen til endometrium; og 3) Støtter lutealfasen endre miRNA-ekspresjonen i lutealfasen? Dette for å undersøke steroideffekten på miRNA-regulering. Etterforskerne antar at mange kritiske gener relatert til implantasjon er regulert av miRNA. Denne forskningsinnsatsen vil potensielt fremme vår kunnskap om endometriale egenskaper etter COS og virkningen av tilskudd av sexsteroider. Samlet sett skulle studien bidra til å bedre forstå den genetiske kontrollen av implantasjon. Gjennomføring av denne studien kan også gi målbare vitenskapelige bevis og nyttig informasjon for håndtering av IVF-sykluser.