Caratteristiche della fase luteale endometriale e supporto della fase luteale nei protocolli di stimolazione ovarica controllata con antagonisti del GnRH: attenzione al microRNA

I miRNA sono piccoli RNA non codificanti a singolo filamento che agiscono su specifici mRNA per regolare l'espressione genica. Gli studi hanno suggerito che i miRNA influenzano le attività cellulari nell'utero, compresa la differenziazione cellulare e l'impianto dell'embrione.

Nei cicli di riproduzione assistita, la stimolazione ovarica controllata (COS) determina livelli di steroidi soprafisiologici ed è associata a concentrazioni molto basse di ormone luteinizzante durante la fase luteinica, il periodo perimplantare e di impianto. Il supporto della fase luteale, la somministrazione di farmaci volti a supportare il processo di impianto, è stata una pratica di routine nelle cliniche di fecondazione in vitro (IVF). È stato riscontrato che il supporto della fase luteale con ormone steroideo migliora i tassi di gravidanza quando le gonadotropine della menopausa umana sono state utilizzate in combinazione con gli agonisti del GnRH per la stimolazione ovarica e la fecondazione in vitro. I rapporti sull'effetto dell'integrazione di steroidi nei protocolli di antagonisti del GnRH sono limitati.

Il progetto proposto è un'estensione del nostro precedente studio sulle caratteristiche della fase luteale endometriale e sul supporto della fase luteale nei protocolli di iperstimolazione ovarica controllata con antagonisti dell'ormone di rilascio delle gonadotropine. Il significato di questo studio si basa sull'importanza della fase luteale endometriale dopo COS per il processo di impianto. La disponibilità di donatori di ovociti nei programmi di tecnologia di riproduzione assistita offre un'opportunità unica per studiare l'impatto dei diversi protocolli di stimolazione sulla qualità della fase luteinica. Inoltre, il modello di donatore di ovociti può consentirci di valutare l'impatto di diversi protocolli di supporto luteale direttamente sulla preparazione endometriale mediante marcatori istologici e biochimici.

Disegno dello studio: i soggetti dello studio sono stati sottoposti a stimolazione ovarica secondo un protocollo di gonadotropina/antagonista del GnRH. Tutte le donatrici avevano una misurazione basale dei livelli sierici di ormone follicolo-stimolante (FSH) ed estradiolo il secondo giorno dei loro cicli mestruali. A condizione che i livelli sierici di FSH fossero inferiori a 10 mIU/ml ei livelli di E2 inferiori a 60 pg/ml, la stimolazione ovarica veniva avviata con FSH ricombinante. La dose giornaliera è stata aggiustata in base allo sviluppo follicolare mediante ecografia transvaginale seriale e risposta sierica E2. Una dose giornaliera serale di ganirelix acetato è stata iniziata il 6° giorno di stimolazione e continuata per tutto il giorno della somministrazione di gonadotropina corionica umana. Quando almeno tre follicoli hanno raggiunto un diametro medio di 18 mm, l'ovulazione è stata attivata con una singola dose di gonadotropina corionica umana (hCG). Il prelievo transvaginale di ovociti ecograficamente guidato è stato eseguito 34-36 ore dopo la somministrazione di hCG.

Per lo studio verranno utilizzate trenta biopsie endometriali da donatrici di ovociti nei loro cicli COS. I soggetti dello studio sono stati randomizzati in 4 gruppi. Grp 1: giorno del recupero, non ha ricevuto alcun supporto della fase luteale, che funge da linea di base; grp2: 3, 5 e 10 giorni dopo il recupero senza supporto della fase luteale, che funge da controllo; grp3: 3, 5 e 10 giorni dopo il prelievo, supporto della fase luteinica con progesterone sotto forma di supposte vaginali a partire dal giorno successivo al prelievo; grp4: dose orale giornaliera di 2 mg di 17β-estradiolo in aggiunta al progesterone micronizzato. Immediatamente dopo la biopsia endometriale tutti i campioni sono stati conservati in serbatoi di azoto liquido a -196°C.

L'RNA totale sarà isolato e il microarray sarà eseguito utilizzando un pannello di espressione di miRNA Illumina. I risultati dell'array saranno compilati e analizzati concentrandosi sui seguenti aspetti: i geni bersaglio dei miRNA prominenti, il profilo dei miRNA in relazione alle vie del gene bersaglio; profilo di espressione di miRNA in relazione alla datazione e allo stato dell'endometrio; effetto del supporto della fase luteinica sull'espressione del miRNA dopo la stimolazione ovarica. Verranno eseguiti almeno 3 array di miRNA per ciascun campione ai fini dell'analisi statistica. Saranno necessari un totale di 30 array per tutti i campioni di tutti i gruppi.

In questo studio, i ricercatori pongono tre domande: 1) Quanti e quali tipi di miRNA sono presenti nell'endometrio durante la stimolazione ovarica? Questo per identificare i miRNA e i geni bersaglio associati che sono rilevanti per la ricettività dell'endometrio; 2) I livelli di espressione di miRNA cambiano durante la fase luteinica o durante la finestra dell'impianto? Questo per esaminare la dinamica dei miRNA associati al processo di rimodellamento dell'endometrio; e 3) Il supporto della fase luteale altera l'espressione del miRNA nella fase luteale? Questo per studiare l'effetto degli steroidi sulla regolazione del miRNA. I ricercatori ipotizzano che molti geni critici correlati all'impianto siano regolati dai miRNA. Questo sforzo di ricerca potrebbe potenzialmente far avanzare la nostra conoscenza delle caratteristiche dell'endometrio dopo la COS e l'impatto dell'integrazione con steroidi sessuali. Nel complesso lo studio dovrebbe aiutare a comprendere meglio il controllo genetico dell'impianto. Il completamento di questo studio può anche fornire prove scientifiche misurabili e informazioni utili per la gestione dei cicli di fecondazione in vitro.