Endometrial lutealfasekarakteristik og lutealfasestøtte i kontrollerede ovariestimuleringsprotokoller med GnRH-antagonister: Fokus på mikroRNA

MiRNA'er er enkeltstrengede små ikke-kodende RNA'er, der virker på specifikke mRNA'er for at regulere genekspressionen. Undersøgelser har antydet, at miRNA'er påvirker cellulære aktiviteter i livmoderen, herunder celledifferentiering og embryoimplantation.

I assisterede reproduktionscyklusser resulterer kontrolleret ovariestimulering (COS) i suprafysiologiske steroidniveauer og er forbundet med meget lav koncentration af luteiniserende hormon under lutealfasen, peri-implantations- og implantationsperioden. Lutealfasestøtte, administration af medicin rettet mod at understøtte implantationsprocessen, har været en rutinemæssig praksis i in vitro fertilisering (IVF) klinikker. Lutealfasestøtte med steroidhormon har vist sig at forbedre graviditetsraterne, når humane menopausale gonadotropiner blev brugt sammen med GnRH-agonister til ovariestimulering og IVF. Rapporter om effekten af ​​steroidtilskud i GnRH-antagonistprotokoller er begrænsede.

Det foreslåede projekt er en forlængelse af vores tidligere undersøgelse af Endometrial Luteal Phase Characteristics og Luteal Phase Support i kontrollerede ovariehyperstimuleringsprotokoller med gonadotropinfrigivende hormonantagonister. Betydningen af ​​denne undersøgelse er baseret på betydningen af ​​lutealfase endometrial efter COS for implantationsprocessen. Tilgængeligheden af ​​oocytdonorer i teknologiske programmer for assisteret reproduktion giver en unik mulighed for at studere virkningen af ​​forskellige stimuleringsprotokoller på kvaliteten af ​​lutealfasen. Derudover kan oocytdonormodellen give os mulighed for at evaluere virkningen af ​​forskellige luteale støtteprotokoller direkte på endometriepræparatet ved hjælp af histologiske såvel som biokemiske markører.

Studiedesign: Forsøgspersoner gennemgik ovariestimulering i henhold til en gonadotropin/GnRH-antagonistprotokol. Alle donorer havde en baseline måling af serum follikelstimulerende hormon (FSH) og østradiol niveauer på den anden dag af deres menstruationscyklus. Forudsat at serum-FSH-niveauerne var mindre end 10mIU/ml, og E2-niveauerne var mindre end 60pg/ml, blev ovariestimulering påbegyndt med rekombinant FSH. Den daglige dosis blev justeret i henhold til follikulær udvikling ved seriel transvaginal ultralyd og serum E2-respons. En daglig aftendosis af ganirelixacetat blev påbegyndt på den 6. stimuleringsdag og fortsatte gennem dagen for administration af humant choriongonadotropin. Når mindst tre follikler nåede en gennemsnitlig diameter på 18 mm, blev ægløsning udløst med en enkelt dosis humant choriongonadotropin (hCG). Sonografisk styret transvaginal oocytudhentning blev udført 34-36 timer efter hCG-administrationen.

Tredive endometriebiopsier fra oocytdonorer på deres COS-cyklusser vil blive brugt til undersøgelsen. Forsøgspersoner er blevet randomiseret i 4 grupper. Grp 1: dag for genfinding, modtog ingen lutealfase-støtte, som tjener som basislinje; grp2: 3, 5 og 10 dage efter udtagning uden lutealfaseunderstøttelse, som tjener som kontrol; grp3: 3, 5 og 10 dage efter udtagning, lutealfasestøtte med progesteron i form af vaginale stikpiller startende fra dagen efter udtagning; grp4: daglig oral dosis på 2 mg 17β-østradiol ud over det mikroniserede progesteron. Umiddelbart efter endometriebiopsien blev alle prøver opbevaret i beholdere med flydende nitrogen ved -196°C.

Total RNA vil blive isoleret, og mikroarray vil blive udført ved hjælp af et Illumina miRNA ekspressionspanel. Array-resultater vil blive kompileret og analyseret med fokus på følgende aspekter: target-generne af fremtrædende miRNA'er, miRNA-profil i forhold til target-gen-pathways; miRNA ekspressionsprofil i forhold til endometrial datering og status; effekt af lutealfasestøtte på miRNA-ekspression efter ovariestimulering. Minimum 3 miRNA-arrays vil blive kørt for hver prøve med henblik på statistisk analyse. I alt 30 arrays vil være nødvendige for alle prøver fra alle grupper.

I denne undersøgelse stiller efterforskerne tre spørgsmål: 1) Hvor mange og hvilke typer miRNA'er er der i endometriet under ovariestimulering? Dette er for at identificere miRNA'er og associerede målgener, der er relevante for endometriums modtagelighed; 2) Ændres niveauer af miRNA-ekspression under lutealfasen eller under implantationsvinduet? Dette er for at undersøge dynamikken i miRNA'er, der er forbundet med ombygningsprocessen af ​​endometrium; og 3) Ændrer lutealfasen miRNA-ekspression i lutealfasen? Dette er for at undersøge steroideffekten på miRNA-reguleringen. Efterforskerne antager, at mange kritiske gener relateret til implantation er reguleret af miRNA'er. Denne forskningsindsats vil potentielt fremme vores viden om endometriekarakteristika efter COS og virkningen af ​​sexsteroidtilskud. Samlet set skulle undersøgelsen hjælpe med bedre at forstå den genetiske kontrol af implantation. Færdiggørelse af denne undersøgelse kan også give målbar videnskabelig dokumentation og nyttig information til styring af IVF-cyklusser.