Krevní destičky v regeneraci jater

Výzkumníci mohli dříve prokázat, že růstové faktory odvozené od krevních destiček, jako je TSP-1 a 5-HT, jsou důležité při regeneraci lidských jater. V tomto projektu se výzkumníci snaží objasnit, jak krevní destičky specificky uvolňují své granule. Ve skutečnosti, zatímco husté granule uložené 5-HT indukují proliferaci hepatocytů, alfa-granule uložené TSP-1 snižují jejich proliferační potenciál. Ještě důležitější je, že různé pro-proliferativní růstové faktory, jako je VEGF, jsou také uloženy v alfa-granulích. Proto by systémové snížení počtu krevních destiček snížilo proliferativní i antiproliferativní faktory. Bylo postulováno vysoce regulované uvolňování granulí, které umožňuje krevním destičkám vykonávat specifické funkce. V roce 2008 Italiano a spol. předložili přesvědčivé in vitro důkazy, že krevní destičky uchovávají molekuly v oddělených granulích, které jsou schopny specificky uvolňovat po aktivaci krevních destiček. Toto zjištění navíc podporují výsledky jiných skupin.

Cílem tohoto projektu je charakterizovat aktivaci trombocytů u pacientů s resekcí jater a určit, zda specifické profily aktivace trombocytů korelují s klinickým výsledkem.

Plán projektu

Zařazení pacienti:

Celkem bude zahrnuto 40 pacientů podstupujících hemihepatektomii. Pacienti budou peroperačně pečlivě sledováni. Příprava plazmy, séra, krevních destiček a tkáně bude provedena tak, jak je uvedeno níže.

Hypotéza č. 1:

Po resekci jater se zvyšují markery aktivace krevních destiček.

Aby se potvrdilo počáteční pozorování specifického uvolňování granulí výzkumnými pracovníky, bude během regenerace jater monitorována aktivace krevních destiček. Vyšetřovatelé budou zejména hodnotit markery aktivace krevních destiček během perioperačního období. Popisným způsobem výzkumníci identifikují perioperační fluktuace aktivace krevních destiček jako odraz fyziologických procesů během regenerace jater. To by mělo výzkumníkům umožnit objasnit výskyt aktivace krevních destiček v lidském prostředí, jak byla popsána na myších modelech. Ještě důležitější je, že analýzy výzkumníků mohly identifikovat potenciální cíle léčby u pacientů s nedostatečnou regenerací jater.

Hypotéza č. 2:

Obsah intradestičkových granulí se po resekci jater snižuje.

V perioperačním období budou hodnoceny bioaktivní molekuly uložené v destičkových alfa granulích (intra destička - IP). Protože během přípravy séra dochází k degranulaci všech krevních destiček, IP hladiny obsahu granulí budou vypočteny odečtením plazmy od hodnot sérového růstového faktoru. Dále pro potvrzení těchto vypočtených hodnot budou generovány extrakty krevních destiček a komparativně analyzovány na hladiny IP růstového faktoru. Vyšetřovatelé budou dále schopni identifikovat perioperační fluktuace IP růstových faktorů jako odraz specifického intrahepatálního uvolňování během regenerace jater porovnáním krevních vzorků před a jeden den po resekci jater.

Hypotéza č. 3:

Krevní destičky jsou lokálně obohaceny a aktivovány v místě regenerace jater.

Při klasické hemihepatektomii se před mobilizací a disekcí jater nejprve podváže portální žíla tumoru obsahující jaterní lalok. Předpokládá se, že zvýšení portálního tlaku ve zbývajících játrech po částečné hepatektomii je hlavním induktorem regenerace jater. (37-40) Aby bylo možné vyhodnotit, zda krevní destičky hrají kritickou roli během procesu zahájení regenerace jater, budou vzorky tkáně odebrány před ligací portální žíly a jednu hodinu po ligaci portální žíly (v době zahájení regenerace jater)( design studie je znázorněn na obrázku 3). Vzorky jater pak budou komparativně analyzovány na adhezi krevních destiček a expresi proteinů a mRNA.

Pro další vyhodnocení významu krevních destiček v přísně regulovaném procesu regenerace jater bude odebrána krev 1 hodinu po ligaci portální žíly. Krev bude odebrána zejména z portální žíly (před játry) az jaterní žíly (po játrech). Z těchto vzorků budou izolovány krevní destičky a bude vyhodnocen stupeň aktivace (podrobnosti viz níže). Dále bude analyzován obsah IP růstových faktorů a extraktů krevních destiček, aby odrážel jejich intrahepatální uvolňování.

Hypotéza č. 4:

Peroperační aktivace krevních destiček má vliv na pooperační výsledek

Bude analyzován prediktivní potenciál markerů aktivace krevních destiček a IP růstových faktorů k identifikaci pacientů se špatným pooperačním klinickým výsledkem. Jako výstupní parametry budou hodnoceny pooperační LD, morbidita nebo mortalita. Tyto analýzy mohou identifikovat markery pro výběr pacientů, kteří by neměli podstoupit hepatektomii, ale měli by lépe využívat alternativní léčbu. Dále bylo možné identifikovat potenciální cíle léčby u pacientů s nedostatečnou regenerací jater.