Plaquetas en la Regeneración del Hígado

Los investigadores pudieron demostrar previamente que los factores de crecimiento derivados de plaquetas como TSP-1 y 5-HT son relevantes en la regeneración del hígado humano. En este proyecto, los investigadores pretenden dilucidar cómo las plaquetas liberan específicamente sus gránulos. De hecho, mientras que la 5-HT almacenada en gránulos densos induce la proliferación de hepatocitos, la TSP-1 almacenada en gránulos alfa reduce su potencial proliferativo. Más importante aún, varios factores de crecimiento pro-proliferativos como VEGF también se almacenan en gránulos alfa. Por lo tanto, una reducción sistémica en el recuento de plaquetas reduciría tanto los factores pro como los antiproliferativos. Se ha postulado una liberación de gránulos altamente regulada para permitir que las plaquetas ejerzan funciones específicas. En 2008, Italiano et al. presentó pruebas in vitro convincentes de que las plaquetas almacenan moléculas en gránulos separados, que pueden liberar específicamente tras la activación plaquetaria. Además, los resultados de otros grupos respaldan este hallazgo.

El objetivo de este proyecto es caracterizar la activación plaquetaria en pacientes con resección hepática y determinar si los perfiles específicos de activación plaquetaria se correlacionan con el resultado clínico.

Plan de proyecto

Pacientes incluidos:

Se incluirán un total de 40 pacientes sometidos a hemihepatectomía. Los pacientes serán monitoreados de cerca perioperatoriamente. La preparación de plasma, suero, plaquetas y tejidos se realizará como se describe a continuación.

Hipótesis No. 1:

Los marcadores de activación de plaquetas circulantes aumentan después de la resección hepática.

Para confirmar la observación inicial de los investigadores de la liberación de gránulos específicos, se controlará la activación plaquetaria durante la regeneración del hígado. En particular, los investigadores evaluarán los marcadores de activación plaquetaria durante el período perioperatorio. De manera descriptiva, los investigadores identificarán las fluctuaciones perioperatorias de la activación plaquetaria como reflejo de los procesos fisiológicos durante la regeneración del hígado. Esto debería permitir a los investigadores dilucidar la aparición de activación plaquetaria en el entorno humano, tal como se ha descrito en modelos murinos. Más importante aún, los análisis de los investigadores podrían identificar posibles objetivos de tratamiento en pacientes con regeneración hepática insuficiente.

Hipótesis No. 2:

El contenido granular intraplaquetario disminuye después de la resección hepática.

Las moléculas bioactivas almacenadas en gránulos de plaquetas alfa (intra plaquetas - IP), serán evaluadas durante el período perioperatorio. Dado que durante la preparación del suero todas las plaquetas se desgranulan, los niveles IP del contenido de gránulos se calcularán restando el plasma de los valores del factor de crecimiento sérico. Además, para confirmar estos valores calculados, se generarán extractos de plaquetas y se analizarán comparativamente los niveles del factor de crecimiento IP. Además, los investigadores podrán identificar las fluctuaciones perioperatorias de los factores de crecimiento IP como un reflejo de la liberación intrahepática específica durante la regeneración hepática, comparando muestras de sangre antes y un día después de la resección hepática.

Hipótesis No. 3:

Las plaquetas se enriquecen localmente y se activan en el sitio de regeneración del hígado.

Durante el proceso de una hemihepatectomía clásica, la vena porta del lóbulo hepático que contiene el tumor se liga inicialmente antes de la movilización y disección del hígado. Se cree que el aumento de la presión portal dentro del hígado restante después de la hepatectomía parcial es el principal inductor de la regeneración del hígado. (37-40) Para evaluar si las plaquetas juegan un papel fundamental durante el proceso de inicio de la regeneración hepática, se recolectarán muestras de tejido antes de la ligadura de la vena porta y una hora después de la ligadura de la vena porta (en el momento del inicio de la regeneración hepática)( el diseño del estudio se ilustra en la figura 3). A continuación, las muestras de hígado se analizarán comparativamente en cuanto a la adhesión plaquetaria y la proteína, así como la expresión de ARNm.

Para evaluar más a fondo la relevancia de las plaquetas en el proceso estrictamente regulado de regeneración hepática, se recolectará sangre 1 hora después de la ligadura de la vena porta. En particular, se extraerá sangre de la vena porta (antes del hígado) y de una vena del hígado (después del hígado). A partir de estas muestras, se aislarán las plaquetas y se evaluará el grado de activación (véanse los detalles a continuación). Además, se analizará el contenido de factores de crecimiento IP y extractos de plaquetas para reflejar su liberación intrahepática.

Hipótesis No. 4:

La activación plaquetaria perioperatoria tiene un impacto en el resultado postoperatorio

Se analizará el potencial predictivo de los marcadores de activación plaquetaria y los factores de crecimiento IP para identificar pacientes con mala evolución clínica postoperatoria. Como parámetros de resultado se evaluará la LD postoperatoria, la morbilidad o la mortalidad. Estos análisis podrían identificar marcadores para seleccionar pacientes que no deberían someterse a una hepatectomía pero que deberían ser mejor atendidos con tratamientos alternativos. Además, podrían identificarse objetivos de tratamiento potenciales en pacientes con regeneración hepática insuficiente.