Plaquetas na Regeneração do Fígado

Os pesquisadores puderam mostrar anteriormente que fatores de crescimento derivados de plaquetas, como TSP-1 e 5-HT, são relevantes na regeneração do fígado humano. Neste projeto os pesquisadores pretendem elucidar como as plaquetas liberam especificamente seus grânulos. De fato, enquanto os grânulos densos armazenados em 5-HT induzem a proliferação de hepatócitos, os grânulos alfa TSP-1 armazenados reduzem seu potencial proliferativo. Mais importante, vários fatores de crescimento pró-proliferativos como VEGF também são armazenados em grânulos alfa. Portanto, uma redução sistêmica na contagem de plaquetas reduziria tanto os fatores pró quanto os antiproliferativos. Uma liberação de grânulos altamente regulada foi postulada para permitir que as plaquetas exerçam funções específicas. Em 2008, Italiano et al. apresentaram evidências in vitro convincentes de que as plaquetas armazenam moléculas em grânulos separados, que são capazes de liberar especificamente após a ativação plaquetária. Além disso, resultados de outros grupos corroboram essa descoberta.

O objetivo deste projeto é caracterizar a ativação plaquetária em pacientes com ressecção hepática e determinar se os perfis específicos de ativação plaquetária se correlacionam com o resultado clínico.

Plano de projeto

Pacientes incluídos:

Serão incluídos 40 pacientes submetidos à hemihepatectomia. Os pacientes serão monitorados de perto no período perioperatório. A preparação de plasma, soro, plaquetas e tecidos será realizada conforme descrito abaixo.

Hipótese nº 1:

Marcadores de ativação de plaquetas circulantes aumentam após ressecção hepática.

Para confirmar a observação inicial dos investigadores sobre a liberação específica de grânulos, a ativação plaquetária será monitorada durante a regeneração hepática. Em particular, os investigadores avaliarão os marcadores de ativação plaquetária durante o período perioperatório. De forma descritiva, os investigadores identificarão as flutuações perioperatórias da ativação plaquetária como reflexo dos processos fisiológicos durante a regeneração hepática. Isso deve permitir aos investigadores elucidar a ocorrência de ativação plaquetária no ambiente humano, conforme descrito em modelos murinos. Mais importante, as análises dos investigadores podem identificar potenciais alvos de tratamento em pacientes com regeneração hepática insuficiente.

Hipótese nº 2:

O conteúdo dos grânulos intraplaquetários diminui após a ressecção hepática.

Moléculas bioativas armazenadas em grânulos alfa plaquetários (intraplaquetas - IP), serão avaliadas durante o período perioperatório. Como durante a preparação do soro todas as plaquetas degranulam, os níveis IP do conteúdo dos grânulos serão calculados pela subtração do plasma dos valores do fator de crescimento sérico. Além disso, para confirmar esses valores calculados, extratos de plaquetas serão gerados e analisados ​​comparativamente para níveis de fator de crescimento IP. Os investigadores poderão ainda identificar flutuações perioperatórias de fatores de crescimento IP como um reflexo da liberação intra-hepática específica durante a regeneração hepática, comparando amostras de sangue antes e um dia após a ressecção hepática.

Hipótese nº 3:

As plaquetas são enriquecidas localmente e ativadas no local da regeneração hepática.

Durante o processo de uma hemihepatectomia clássica, a veia porta do tumor que contém o lobo hepático é inicialmente ligada antes da mobilização e dissecção do fígado. Acredita-se que o aumento da pressão portal no fígado remanescente após hepatectomia parcial seja o principal indutor da regeneração hepática. (37-40) Para avaliar se as plaquetas desempenham um papel crítico durante o processo de iniciação da regeneração hepática, amostras de tecido serão coletadas antes da ligadura da veia porta e uma hora após a ligadura da veia porta (no momento do início da regeneração hepática)( o desenho do estudo é ilustrado na figura 3). Amostras de fígado serão então analisadas comparativamente para adesão de plaquetas e proteínas, bem como expressão de mRNA.

Para avaliar ainda mais a relevância das plaquetas no processo fortemente regulado de regeneração do fígado, o sangue será coletado 1 hora após a ligadura da veia porta. Em particular, o sangue será coletado da veia porta (antes do fígado) e de uma veia do fígado (depois do fígado). A partir dessas amostras, as plaquetas serão isoladas e o grau de ativação será avaliado (ver detalhes abaixo). Além disso, o conteúdo de fatores de crescimento IP e extratos de plaquetas serão analisados ​​para refletir sua liberação intra-hepática.

Hipótese nº 4:

A ativação plaquetária perioperatória tem impacto no resultado pós-operatório

Será analisado o potencial preditivo de marcadores de ativação plaquetária e fatores de crescimento IP para identificar pacientes com má evolução clínica pós-operatória. Como parâmetros de desfecho serão avaliados DL pós-operatório, morbidade ou mortalidade. Essas análises podem identificar marcadores para selecionar pacientes que não devem ser submetidos à hepatectomia, mas que serão melhor atendidos com tratamentos alternativos. Além disso, potenciais alvos de tratamento em pacientes com regeneração hepática insuficiente podem ser identificados.