Verihiutaleet maksan uudistamisessa

Tutkijat saattoivat aiemmin osoittaa, että verihiutaleperäiset kasvutekijät, kuten TSP-1 ja 5-HT, ovat tärkeitä ihmisen maksan regeneraatiossa. Tässä projektissa tutkijat pyrkivät selvittämään, kuinka verihiutaleet spesifisesti vapauttavat rakeitaan. Todellakin, vaikka tiiviit rakeet, joihin on varastoitu 5-HT, indusoivat hepatosyyttien proliferaatiota, varastoidut TSP-1:n alfarakeet vähentävät niiden lisääntymispotentiaalia. Vielä tärkeämpää on, että erilaisia ​​proproliferatiivisia kasvutekijöitä, kuten VEGF:ää, säilytetään myös alfarakeissa. Siksi verihiutaleiden määrän systeeminen lasku vähentäisi sekä pro- että antiproliferatiivisia tekijöitä. Voimakkaasti säädellyn rakeiden vapautumisen on oletettu mahdollistavan verihiutaleiden suorittaa tiettyjä toimintoja. Vuonna 2008 Italiano et al. esitti vakuuttavia in vitro -todisteita siitä, että verihiutaleet varastoivat molekyylejä erillisissä rakeissa, jotka ne pystyvät vapauttamaan spesifisesti verihiutaleiden aktivoituessa. Lisäksi muiden ryhmien tulokset tukevat tätä havaintoa.

Tämän projektin tavoitteena on karakterisoida verihiutaleiden aktivaatiota potilailla, joilla on maksaresektio, ja määrittää, korreloivatko tietyt verihiutaleiden aktivaatioprofiilit kliinisen lopputuloksen kanssa.

Projekti suunnitelma

Mukana olevat potilaat:

Mukana on yhteensä 40 potilasta, joille tehdään hemihepatektomia. Potilaita seurataan tarkasti perioperatiivisesti. Plasma, seerumi, verihiutaleet ja kudokset valmistetaan alla kuvatulla tavalla.

Hypoteesi nro 1:

Verenkierron verihiutaleaktivaatiomarkkerit lisääntyvät maksaresektion jälkeen.

Jotta voidaan vahvistaa tutkijoiden alustava havainto spesifisen rakeiden vapautumisesta, verihiutaleiden aktivaatiota seurataan maksan regeneraation aikana. Erityisesti tutkijat arvioivat verihiutaleiden aktivaatiomarkkereita perioperatiivisen jakson aikana. Kuvaavalla tavalla tutkijat tunnistavat verihiutaleiden aktivaation perioperatiiviset vaihtelut heijastuksena fysiologisista prosesseista maksan regeneraation aikana. Tämän pitäisi antaa tutkijoille mahdollisuus selvittää verihiutaleiden aktivaation esiintyminen ihmisympäristössä, kuten se on kuvattu hiirimalleissa. Vielä tärkeämpää on, että tutkijoiden analyysit voisivat tunnistaa mahdolliset hoitokohteet potilailla, joilla on riittämätön maksan regeneraatio.

Hypoteesi nro 2:

Verihiutaleiden sisäinen rakeiden pitoisuus pienenee maksan resektion jälkeen.

Verihiutaleiden alfarakeissa (intra trombosyytti - IP) varastoidut bioaktiiviset molekyylit arvioidaan perioperatiivisen ajanjakson aikana. Koska seerumin valmistuksen aikana kaikki verihiutaleet hajoavat, rakeiden sisällön IP-tasot lasketaan vähentämällä plasma seerumin kasvutekijäarvoista. Lisäksi näiden laskettujen arvojen vahvistamiseksi luodaan verihiutaleuutteita ja analysoidaan IP-kasvutekijätasoja. Lisäksi tutkijat pystyvät tunnistamaan IP-kasvutekijöiden perioperatiiviset vaihtelut heijastuksena spesifistä intrahepaattista vapautumista maksan regeneraation aikana vertaamalla verinäytteitä ennen maksaresektiota ja päivää sen jälkeen.

Hypoteesi nro 3:

Verihiutaleet rikastuvat paikallisesti ja aktivoituvat maksan uudistumiskohdassa.

Klassisen hemihepatektomian aikana maksalohkon sisältävän kasvaimen porttilaskimo sidotaan aluksi ennen maksan mobilisointia ja dissektiota. Portaalipaineen nousun jäljellä olevassa maksassa osittaisen hepatektomian jälkeen uskotaan olevan tärkein maksan regeneraation indusoija. (37-40) Sen arvioimiseksi, onko verihiutaleilla kriittinen rooli maksan regeneraation alkamisprosessissa, kudosnäytteitä kerätään ennen porttilaskimon ligaatiota ja tunti porttilaskimon ligaation jälkeen (maksan regeneraation alkaessa)( tutkimuksen suunnittelu on havainnollistettu kuvassa 3). Maksanäytteistä analysoidaan sitten vertailevasti verihiutaleiden adheesio ja proteiini sekä mRNA:n ilmentyminen.

Verihiutaleiden merkityksen arvioimiseksi edelleen tiukasti säädellyssä maksan regeneraatioprosessissa verta kerätään tunnin kuluttua porttilaskimon ligaatiosta. Erityisesti verta otetaan porttilaskimosta (ennen maksaa) ja maksalaskimosta (maksan jälkeen). Näistä näytteistä eristetään verihiutaleita ja aktivaatioaste arvioidaan (katso yksityiskohdat alla). Lisäksi IP-kasvutekijöiden ja verihiutaleuutteiden pitoisuudet analysoidaan niiden intrahepaattisen vapautumisen heijastamiseksi.

Hypoteesi nro 4:

Perioperatiivinen verihiutaleiden aktivaatio vaikuttaa postoperatiiviseen lopputulokseen

Verihiutaleiden aktivaatiomarkkerien ja IP-kasvutekijöiden ennakoiva potentiaali tunnistaa potilaita, joilla on huono postoperatiivinen kliininen tulos. Tulosparametreina postoperatiivinen LD, sairastuvuus tai kuolleisuus arvioidaan. Nämä analyysit saattavat tunnistaa markkereita, joiden avulla valitaan potilaat, joille ei pitäisi tehdä hepatektomiaa, mutta joille on parempi tarjota vaihtoehtoisia hoitoja. Lisäksi voidaan tunnistaa mahdolliset hoitokohteet potilailla, joiden maksan uusiutuminen ei ole riittävää.