Тромбоциты в регенерации печени

Ранее исследователи могли показать, что факторы роста, полученные из тромбоцитов, такие как TSP-1 и 5-HT, имеют значение для регенерации печени человека. В этом проекте исследователи стремятся выяснить, как именно тромбоциты выделяют свои гранулы. Действительно, в то время как 5-HT в плотных гранулах вызывает пролиферацию гепатоцитов, альфа-гранулы в TSP-1 снижают их пролиферативный потенциал. Что еще более важно, различные пролиферативные факторы роста, такие как VEGF, также хранятся в альфа-гранулах. Следовательно, системное снижение количества тромбоцитов приведет к снижению как про-, так и антипролиферативных факторов. Было постулировано, что строго регулируемое высвобождение гранул позволяет тромбоцитам выполнять определенные функции. В 2008 г. Итальяно и соавт. представили убедительные доказательства in vitro, что тромбоциты хранят молекулы в отдельных гранулах, которые они способны специфически высвобождать при активации тромбоцитов. Кроме того, результаты других групп подтверждают этот вывод.

Цель этого проекта — охарактеризовать активацию тромбоцитов у пациентов с резекцией печени и определить, коррелируют ли конкретные профили активации тромбоцитов с клиническим исходом.

План проэкта

Включенные пациенты:

Всего будет включено 40 пациентов, перенесших гемигепатэктомию. Пациенты будут находиться под тщательным наблюдением в периоперационном периоде. Подготовку плазмы, сыворотки, тромбоцитов и тканей проводят, как описано ниже.

Гипотеза №1:

Маркеры активации циркулирующих тромбоцитов увеличиваются после резекции печени.

Чтобы подтвердить первоначальное наблюдение исследователей за высвобождением специфических гранул, активация тромбоцитов будет отслеживаться во время регенерации печени. В частности, исследователи будут оценивать маркеры активации тромбоцитов в периоперационном периоде. В описательной форме исследователи будут идентифицировать периоперационные колебания активации тромбоцитов как отражение физиологических процессов во время регенерации печени. Это должно позволить исследователям выяснить возникновение активации тромбоцитов у человека, как это было описано на мышиных моделях. Что еще более важно, анализы исследователей могли определить потенциальные цели лечения у пациентов с недостаточной регенерацией печени.

Гипотеза №2:

Содержание внутритромбоцитарных гранул уменьшается после резекции печени.

Биологически активные молекулы, хранящиеся в альфа-гранулах тромбоцитов (внутритромбоцитарные - IP), будут оцениваться в периоперационный период. Поскольку во время подготовки сыворотки все тромбоциты дегранулируются, уровни внутрибрюшинного содержания гранул будут рассчитываться путем вычитания плазмы из значений фактора роста в сыворотке. Кроме того, для подтверждения этих расчетных значений будут получены экстракты тромбоцитов и проведен сравнительный анализ уровней фактора роста IP. Кроме того, исследователи смогут идентифицировать периоперационные колебания факторов роста IP как отражение специфического внутрипеченочного высвобождения во время регенерации печени путем сравнения образцов крови до и через день после резекции печени.

Гипотеза №3:

Тромбоциты локально обогащаются и активируются в месте регенерации печени.

В процессе классической гемигепатэктомии воротная вена опухоли, содержащей долю печени, первоначально лигируется перед мобилизацией и диссекцией печени. Повышение портального давления в оставшейся печени после частичной гепатэктомии считается основным индуктором регенерации печени. (37-40) Чтобы оценить, играют ли тромбоциты критическую роль в процессе инициации регенерации печени, образцы тканей будут собирать до перевязки воротной вены и через час после перевязки воротной вены (во время инициации регенерации печени) ( дизайн исследования показан на рисунке 3). Затем образцы печени будут подвергнуты сравнительному анализу на предмет адгезии тромбоцитов и белка, а также экспрессии мРНК.

Для дальнейшей оценки значимости тромбоцитов в жестко регулируемом процессе регенерации печени кровь будет собираться через 1 час после перевязки воротной вены. В частности, кровь будет браться из воротной вены (до печени) и из печеночной вены (после печени). Из этих образцов будут выделены тромбоциты и оценена степень активации (подробности см. ниже). Кроме того, будет проанализировано содержание факторов роста IP и экстрактов тромбоцитов, чтобы отразить их внутрипеченочное высвобождение.

Гипотеза №4:

Периоперационная активация тромбоцитов влияет на послеоперационный результат

Будет проанализирован прогностический потенциал маркеров активации тромбоцитов и факторов роста IP для выявления пациентов с плохим послеоперационным клиническим исходом. В качестве исходных параметров будут оцениваться послеоперационная ЛД, заболеваемость или смертность. Эти анализы могут выявить маркеры для отбора пациентов, которым не следует подвергать гепатэктомию, но лучше использовать альтернативные методы лечения. Кроме того, можно было определить потенциальные цели лечения у пациентов с недостаточной регенерацией печени.