Płytki krwi w regeneracji wątroby

Badacze mogli wcześniej wykazać, że czynniki wzrostu pochodzenia płytkowego, takie jak TSP-1 i 5-HT, mają znaczenie w regeneracji ludzkiej wątroby. W ramach tego projektu badacze dążą do wyjaśnienia, w jaki sposób płytki krwi specyficznie uwalniają swoje granulki. Rzeczywiście, podczas gdy gęste granulki przechowywane 5-HT indukują proliferację hepatocytów, alfa-granulki przechowywane TSP-1 zmniejszają ich potencjał proliferacyjny. Co ważniejsze, różne proproliferacyjne czynniki wzrostu, takie jak VEGF, są również przechowywane w granulkach alfa. Dlatego ogólnoustrojowe zmniejszenie liczby płytek krwi zmniejszyłoby zarówno czynniki pro, jak i antyproliferacyjne. Postulowano, że wysoce regulowane uwalnianie granulek umożliwia płytkom wykonywanie określonych funkcji. W 2008 roku Italiano i in. przedstawili przekonujące dowody in vitro, że płytki przechowują cząsteczki w oddzielnych granulkach, które są w stanie specyficznie uwolnić po aktywacji płytek. Ponadto wyniki innych grup potwierdzają to odkrycie.

Celem tego projektu jest scharakteryzowanie aktywacji płytek krwi u pacjentów po resekcji wątroby i określenie, czy określone profile aktywacji płytek korelują z wynikiem klinicznym.

Plan projektu

Uwzględnieni pacjenci:

Uwzględnionych zostanie łącznie 40 pacjentów poddawanych hemihepatektomii. Pacjenci będą ściśle monitorowani w okresie okołooperacyjnym. Przygotowanie osocza, surowicy, płytek krwi i tkanek zostanie przeprowadzone zgodnie z poniższym opisem.

Hipoteza nr 1:

Krążące markery aktywacji płytek wzrastają po resekcji wątroby.

Aby potwierdzić wstępną obserwację badaczy uwalniania określonych granulek, podczas regeneracji wątroby monitorowana będzie aktywacja płytek krwi. W szczególności badacze ocenią markery aktywacji płytek krwi w okresie okołooperacyjnym. W opisowy sposób badacze zidentyfikują okołooperacyjne fluktuacje aktywacji płytek krwi jako odzwierciedlenie procesów fizjologicznych podczas regeneracji wątroby. Powinno to umożliwić badaczom wyjaśnienie występowania aktywacji płytek krwi u ludzi, tak jak zostało to opisane w modelach mysich. Co ważniejsze, analizy badaczy mogą zidentyfikować potencjalne cele leczenia u pacjentów z niewystarczającą regeneracją wątroby.

Hipoteza nr 2:

Zawartość ziarnistości wewnątrzpłytkowych zmniejsza się po resekcji wątroby.

Cząsteczki bioaktywne zmagazynowane w ziarnistościach płytkowych alfa (intra platelet – IP) będą oceniane w okresie okołooperacyjnym. Ponieważ podczas przygotowania surowicy wszystkie płytki krwi ulegają degranulacji, poziomy IP zawartości ziarnistości zostaną obliczone przez odjęcie osocza od wartości czynnika wzrostu w surowicy. Ponadto, aby potwierdzić te obliczone wartości, zostaną wygenerowane ekstrakty płytek krwi i przeanalizowane porównawczo pod kątem poziomów czynnika wzrostu IP. Badacze będą ponadto w stanie zidentyfikować okołooperacyjne fluktuacje czynników wzrostu IP jako odzwierciedlenie specyficznego uwalniania wewnątrzwątrobowego podczas regeneracji wątroby, porównując próbki krwi przed i jeden dzień po resekcji wątroby.

Hipoteza nr 3:

Płytki krwi są lokalnie wzbogacane i aktywowane w miejscu regeneracji wątroby.

Podczas klasycznej hemihepatektomii żyła wrotna guza zawierająca płat wątroby jest wstępnie podwiązywana przed mobilizacją i dysekcją wątroby. Uważa się, że głównym induktorem regeneracji wątroby jest wzrost ciśnienia wrotnego w obrębie pozostałej części wątroby po częściowej hepatektomii. (37-40) Aby ocenić, czy płytki krwi odgrywają kluczową rolę w procesie inicjacji regeneracji wątroby, próbki tkanek zostaną pobrane przed podwiązaniem żyły wrotnej i godzinę po podwiązaniu żyły wrotnej (w momencie rozpoczęcia regeneracji wątroby)( projekt badania przedstawiono na rycinie 3). Próbki wątroby zostaną następnie poddane analizie porównawczej pod kątem adhezji płytek krwi i białka, a także ekspresji mRNA.

W celu dalszej oceny znaczenia płytek krwi w ściśle regulowanym procesie regeneracji wątroby, krew zostanie pobrana 1 godzinę po podwiązaniu żyły wrotnej. W szczególności krew zostanie pobrana z żyły wrotnej (przed wątrobą) oraz z żyły wątrobowej (za wątrobą). Z tych próbek zostaną wyizolowane płytki krwi i oceniony zostanie stopień aktywacji (szczegóły patrz poniżej). Ponadto przeanalizowana zostanie zawartość czynników wzrostu IP i ekstraktów płytek krwi w celu odzwierciedlenia ich wewnątrzwątrobowego uwalniania.

Hipoteza nr 4:

Okołooperacyjna aktywacja płytek krwi ma wpływ na wynik pooperacyjny

Przeanalizowany zostanie potencjał predykcyjny markerów aktywacji płytek krwi i czynników wzrostu IP w celu identyfikacji pacjentów ze złymi pooperacyjnymi wynikami klinicznymi. Jako parametry wyniku pooperacyjna LD zostanie oceniona zachorowalność lub śmiertelność. Analizy te mogą zidentyfikować markery w celu wybrania pacjentów, którzy nie powinni być poddawani hepatektomii, ale lepiej byłoby im służyć alternatywnymi metodami leczenia. Ponadto można zidentyfikować potencjalne cele leczenia u pacjentów z niewystarczającą regeneracją wątroby.