Piastrine nella rigenerazione del fegato

I ricercatori hanno potuto dimostrare in precedenza che i fattori di crescita derivati ​​dalle piastrine come TSP-1 e 5-HT sono rilevanti nella rigenerazione del fegato umano. In questo progetto i ricercatori mirano a chiarire in che modo le piastrine rilasciano specificamente i loro granuli. Infatti, mentre i granuli densi immagazzinati in 5-HT inducono la proliferazione degli epatociti, gli alfa-granuli immagazzinati in TSP-1 riducono il loro potenziale proliferativo. Ancora più importante, vari fattori di crescita pro-proliferativi come VEGF sono anche immagazzinati in alfa-granuli. Pertanto, una riduzione sistemica della conta piastrinica ridurrebbe sia i fattori pro che quelli antiproliferativi. È stato postulato un rilascio di granuli altamente regolato per consentire alle piastrine di esercitare funzioni specifiche. Nel 2008, Italiano et al. ha presentato convincenti prove in vitro che le piastrine immagazzinano molecole in granuli separati, che sono in grado di rilasciare in modo specifico all'attivazione piastrinica. Inoltre, i risultati di altri gruppi supportano questa scoperta.

Lo scopo di questo progetto è caratterizzare l'attivazione piastrinica in pazienti con resezione epatica e determinare se specifici profili di attivazione piastrinica sono correlati all'esito clinico.

Schema del progetto

Pazienti inclusi:

Saranno inclusi un totale di 40 pazienti sottoposti a emiepatectomia. I pazienti saranno attentamente monitorati perioperatoriamente. La preparazione del plasma, del siero, delle piastrine e dei tessuti sarà eseguita come descritto di seguito.

Ipotesi n. 1:

I marcatori di attivazione delle piastrine circolanti aumentano dopo la resezione epatica.

Per confermare l'osservazione iniziale degli investigatori del rilascio specifico di granuli, l'attivazione piastrinica sarà monitorata durante la rigenerazione epatica. In particolare, gli investigatori valuteranno i marcatori di attivazione piastrinica durante il periodo perioperatorio. In modo descrittivo, i ricercatori identificheranno le fluttuazioni perioperatorie dell'attivazione piastrinica come riflesso dei processi fisiologici durante la rigenerazione epatica. Ciò dovrebbe consentire ai ricercatori di chiarire l'occorrenza dell'attivazione piastrinica nell'ambiente umano, come è stato descritto nei modelli murini. Ancora più importante, le analisi dei ricercatori potrebbero identificare potenziali bersagli terapeutici in pazienti con rigenerazione epatica insufficiente.

Ipotesi n. 2:

Il contenuto intragranulare piastrinico diminuisce dopo la resezione epatica.

Le molecole bioattive immagazzinate nei granuli alfa piastrinici (intraplatelet - IP), saranno valutate durante il periodo perioperatorio. Poiché durante la preparazione del siero tutte le piastrine degranulano, i livelli IP del contenuto della granula saranno calcolati sottraendo il plasma dai valori del fattore di crescita del siero. Inoltre, per confermare questi valori calcolati, verranno generati estratti piastrinici e analizzati comparativamente per i livelli del fattore di crescita IP. Gli investigatori saranno inoltre in grado di identificare le fluttuazioni perioperatorie dei fattori di crescita IP come riflesso del rilascio intraepatico specifico durante la rigenerazione epatica, confrontando i campioni di sangue prima e un giorno dopo la resezione epatica.

Ipotesi n. 3:

Le piastrine sono localmente arricchite e attivate nel sito di rigenerazione del fegato.

Durante il processo di una emiepatectomia classica, la vena porta del tumore contenente il lobo epatico viene inizialmente legata prima della mobilizzazione e della dissezione del fegato. Si ritiene che l'aumento della pressione portale all'interno del fegato rimanente dopo epatectomia parziale sia il principale induttore della rigenerazione epatica. (37-40) Per valutare se le piastrine svolgono un ruolo critico durante il processo di inizio della rigenerazione epatica, i campioni di tessuto saranno raccolti prima della legatura della vena porta e un'ora dopo la legatura della vena porta (al momento dell'inizio della rigenerazione del fegato)( il disegno dello studio è illustrato nella figura 3). I campioni di fegato saranno quindi analizzati comparativamente per l'adesione piastrinica e l'espressione di proteine ​​e mRNA.

Per valutare ulteriormente la rilevanza delle piastrine nel processo strettamente regolato della rigenerazione epatica, il sangue sarà raccolto 1 ora dopo la legatura della vena porta. In particolare, il sangue verrà prelevato dalla vena porta (prima del fegato) e da una vena epatica (dopo il fegato). Da questi campioni verranno isolate le piastrine e valutato il grado di attivazione (dettagli vedi sotto). Inoltre, il contenuto dei fattori di crescita IP e degli estratti piastrinici sarà analizzato per riflettere il loro rilascio intraepatico.

Ipotesi n. 4:

L'attivazione piastrinica perioperatoria ha un impatto sull'esito postoperatorio

Verrà analizzato il potenziale predittivo dei marcatori di attivazione piastrinica e dei fattori di crescita IP per identificare i pazienti con scarso esito clinico postoperatorio. Come parametri di esito saranno valutati il ​​LD postoperatorio, la morbilità o la mortalità. Queste analisi potrebbero identificare marcatori per selezionare i pazienti che non dovrebbero essere sottoposti a epatectomia ma che dovrebbero essere meglio serviti con trattamenti alternativi. Inoltre, potrebbero essere identificati potenziali bersagli terapeutici in pazienti con rigenerazione epatica insufficiente.