Bloedplaatjes bij leverregeneratie

De onderzoekers konden eerder aantonen dat van bloedplaatjes afgeleide groeifactoren zoals TSP-1 en 5-HT relevant zijn bij de regeneratie van de menselijke lever. In dit project willen de onderzoekers ophelderen hoe bloedplaatjes specifiek hun granulaat afgeven. Inderdaad, terwijl in dichte korrels opgeslagen 5-HT proliferatie van hepatocyten induceert, vermindert alfa-korrels opgeslagen TSP-1 hun proliferatiepotentieel. Wat nog belangrijker is, is dat verschillende pro-proliferatieve groeifactoren zoals VEGF ook worden opgeslagen in alfa-korrels. Daarom zou een systemische vermindering van het aantal bloedplaatjes zowel pro- als antiproliferatieve factoren verminderen. Er is gepostuleerd dat er een sterk gereguleerde granula-afgifte is om bloedplaatjes specifieke functies te laten uitoefenen. In 2008 hebben Italiano et al. presenteerde overtuigend in vitro bewijs dat bloedplaatjes moleculen opslaan in afzonderlijke korrels, die ze specifiek kunnen vrijgeven bij activatie van bloedplaatjes. Bovendien ondersteunen resultaten van andere groepen deze bevinding.

Het doel van dit project is om de activering van bloedplaatjes bij patiënten met leverresectie te karakteriseren en te bepalen of specifieke profielen van bloedplaatjesactivatie correleren met de klinische uitkomst.

Project Plan

Inbegrepen patiënten:

Er zullen in totaal 40 patiënten worden opgenomen die hemihepatectomie ondergaan. Patiënten worden perioperatief nauwlettend gevolgd. Plasma-, serum-, bloedplaatjes- en weefselpreparatie zal worden uitgevoerd zoals hieronder beschreven.

Hypothese nr. 1:

Circulerende bloedplaatjesactiveringsmarkers nemen toe na leverresectie.

Om de aanvankelijke observatie van de onderzoekers van specifieke granula-afgifte te bevestigen, zal de activatie van bloedplaatjes worden gecontroleerd tijdens leverregeneratie. In het bijzonder zullen de onderzoekers tijdens de perioperatieve periode markers voor activering van bloedplaatjes evalueren. Op een beschrijvende manier zullen de onderzoekers perioperatieve fluctuaties van bloedplaatjesactivatie identificeren als een weerspiegeling van fysiologische processen tijdens leverregeneratie. Dit zou de onderzoekers in staat moeten stellen om het optreden van bloedplaatjesactivering in de menselijke omgeving op te helderen, zoals beschreven in muizenmodellen. Wat nog belangrijker is, is dat de analyses van de onderzoekers potentiële behandelingsdoelen konden identificeren bij patiënten met onvoldoende hepatische regeneratie.

Hypothese nr. 2:

Na leverresectie neemt de inhoud van intrabloedplaatjesgranula af.

Bioactieve moleculen die zijn opgeslagen in alfagranulaat van bloedplaatjes (intrabloedplaatjes - IP), zullen tijdens de perioperatieve periode worden geëvalueerd. Aangezien tijdens serumbereiding alle bloedplaatjes degranuleren, zullen IP-niveaus van granula-inhoud worden berekend door plasma af te trekken van serumgroeifactorwaarden. Om deze berekende waarden te bevestigen, zullen bloedplaatjesextracten worden gegenereerd en vergelijkend worden geanalyseerd op IP-groeifactorniveaus. De onderzoekers zullen verder perioperatieve fluctuaties van IP-groeifactoren kunnen identificeren als een weerspiegeling van specifieke intrahepatische afgifte tijdens leverregeneratie, door bloedmonsters voorafgaand aan en één dag na leverresectie te vergelijken.

Hypothese nr. 3:

Bloedplaatjes worden lokaal verrijkt en geactiveerd op de plaats van leverregeneratie.

Tijdens het proces van een klassieke hemihepatectomie wordt de poortader van de tumor bevattende leverkwab aanvankelijk geligeerd vóór mobilisatie en dissectie van de lever. Aangenomen wordt dat de toename van de poortdruk in de resterende lever na gedeeltelijke hepatectomie de belangrijkste inductor is van leverregeneratie. (37-40) Om te beoordelen of bloedplaatjes een cruciale rol spelen tijdens het proces van initiatie van leverregeneratie, zullen weefselspecimens worden verzameld voorafgaand aan het afbinden van de poortader en één uur na het afbinden van de poortader (op het moment dat de leverregeneratie begint)( studieontwerp wordt geïllustreerd in figuur 3). Leverspecimens zullen vervolgens vergelijkend worden geanalyseerd op bloedplaatjesadhesie en eiwit- en mRNA-expressie.

Om de relevantie van bloedplaatjes in het strak gereguleerde proces van leverregeneratie verder te evalueren, zal bloed worden verzameld 1 uur na het afbinden van de poortader. Er zal met name bloed worden afgenomen uit de poortader (vóór de lever) en uit een leverader (na de lever). Uit deze monsters zullen bloedplaatjes worden geïsoleerd en de mate van activering zal worden beoordeeld (details zie hieronder). Bovendien zal het gehalte aan IP-groeifactoren en bloedplaatjesextracten worden geanalyseerd om hun intrahepatische afgifte weer te geven.

Hypothese nr. 4:

Perioperatieve activering van bloedplaatjes heeft invloed op het postoperatieve resultaat

Het voorspellend vermogen van merkers voor activering van bloedplaatjes en IP-groeifactoren om patiënten met een slechte postoperatieve klinische uitkomst te identificeren, zal worden geanalyseerd. Als uitkomstparameters zal postoperatieve LD, morbiditeit of mortaliteit worden geëvalueerd. Deze analyses kunnen markers identificeren om patiënten te selecteren die geen hepatectomie zouden moeten ondergaan, maar beter bediend kunnen worden met alternatieve behandelingen. Bovendien konden potentiële behandelingsdoelen bij patiënten met onvoldoende hepatische regeneratie worden geïdentificeerd.