Vliv spotřeby potravy na mikroRNA související s metabolickým syndromem (EFCMRNAMS)

Studovat design. Toto je randomizovaná studie. Studenti prvního ročníku na Universidad Juárez Autónoma de Tabasco (UJAT) jsou v rámci procesu zápisu na univerzitu podrobeni klinickým laboratorním testům. K účasti bude pozváno padesát žen, protože mezi zápisy do DACS převažují ženy. Na začátku a na konci protokolu (tři měsíce) budou odebrány vzorky krve pro klinické a molekulární analýzy. Antropometrická měření budou provedena také na začátku a na konci studie. Během 3 měsíců bude 5 dní v týdnu podáváno jídlo obsahující tradiční jídlo. Jídlo bude obsahovat v průměru 600 kcal, ≤ 50 mg cholesterolu, ≥ 10 g vlákniny, ≥ 130 g zeleniny a ≤ de 200 mg sodíku. Každé jídlo bude doplněno 3 kukuřičnými tortillami standardní velikosti. Kontrolní skupina bude dostávat obvykle konzumované rychlé občerstvení poskytované jídelnou kampusu v podobném kalorickém poměru (Muñoz et al., v tisku)

Antropometrie. Pro stanovení indexu tělesné hmotnosti (BMI) bude podle pokynů Světové zdravotnické organizace (2011) použita klinická váha se stadiometrem (Básculas Nuevo León®, Mexiko) s nosností 200 kg. Váha bude po celou dobu náboru studentů denně kalibrována. BMI bude vypočítáno podle mexického standardu NOM-043-SSA2-2011 (2012). Pro měření obvodu boků a pasu budou použity milimetrové neroztažitelné skleněné pásky o délce 1,80 m a šířce 1 cm (Vitamex® Mexico). Pro populaci tohoto regionu je žádoucí míra boků pro ženy 80 cm a 90 cm pro muže (WHO, 2011). Poměr pas/boky (WHR) se vypočítá vydělením obvodu pasu obvodem boků, kde hodnota 0,85 pro ženy a 0,90 pro muže jsou považovány za hraniční limity (He et al., 2009). Poměr pasu k výšce (WHtR) se vypočítá vydělením míry pasu hodnotou výšky, kde hodnota pod 0,5 je považována za žádoucí (WHO, 2011).

Biochemické parametry. Vzorky krve účastníkům odeberou pracovníci laboratoře klinických analýz ÚJAT po 12hodinovém hladovění. Bude použito sterilní vybavení a krev bude odebírána do zkumavek Vacutainer® Serum (BectonDickinson, Franklin Lakes, New Jersey, USA). Glukóza (GPA), triglyceridy (TG) a celkový cholesterol (TC) budou měřeny pomocí suché analytické metodologie v automatizovaném zařízení VITROS® 250 (Ortho-Clinical Diagnostics Johnson & Johnson, Rochester, NY, USA). stejné zařízení bude použito k provedení jaterních testů, albuminu, globulinů, alkalické fosfatázy, mléčné dehydrogenázy, aspartátaminotransferázy, alaninaminotransferázy.

Glykosylovaný hemoglobin. Bude použita sada činidel Glycohemoglobin Pre-Fil of StanbioLab® (Boerne, Texas, USA). Pro každý standard a vzorek bude rozsah absorbance vypočítán podle vzorce poskytnutého výrobcem. Použije se konverzní faktor a výsledky se uvedou jako HbA1c. Hodnoty mezi 4,2 % a 6,2 % budou považovány za normální.

stanovení mikroRNA. Pro stanovení miRNA budou použity reagenční sady Quiagen®. K získání RNA bude použita sada miRNeasly Serum/Plazma. Jakmile byla RNA purifikována ze vzorků krve, bude provedena oligo T retrotranskriptázová reakce pomocí miScript II RT kitu a pufru miScript HiSpec. Poté bude amplifikace zájmové miARN provedena v termocykleru v reálném čase pomocí sady miScript miRNA polimerázová řetězová reakce (PCR) Array Human Diabetes kit. K vizualizaci amplikonů použijí vyšetřovatelé sadu miScript SYBR Green PCR. Výsledky budou vyhodnoceny pomocí softwaru termocykleru v reálném čase pro měření rozdílů v úrovních transkripce. Termocykler bude analyzovat přírůstky-úbytky signálů vybraných miARN: miR-320, miR-33a/b, miR-145, miR-335 a miR-124a. Bude použit miScript Primer Assay od společnosti Quiagen®. Jako kontroly amplifikačních reakcí budou výzkumníci používat mi-rtc jako kontrolu účinnosti retrotranskriptázy a mir-3p z C. elegans jako kontrolu PCR.

Statistická analýza. Pro zpracování dat bude použita verze 21.0 Statistics Package for the Social Sciences (SPSS, Chicago, Illinois, USA). Pro analýzu dat budou použity deskriptivní statistiky s centrální tendencí a také kontingenční tabulky. K porovnání proměnných ve skupinách bude použit test pro příbuzné vzorky, podle biochemických markerů a pohlaví účastníků, Pearsonův korelační test bude také použit k porovnání proměnných mezi skupinami a pohlavím. Statistická významnost bude nastavena na p ≤ 0,05.

Etické úvahy. Studie byla předložena ke schválení výzkumným a etickým komisím DACS, aby byla zaregistrována na výzkumné divizi Universidad Juárez Autónoma de Tabasco, kód UJAT-DACS-2015-IA-08. Studie je v souladu s Helsinskou deklarací Světové lékařské asociace. Design je v souladu s předpisy obsaženými v obecném zákoně o zdravotním výzkumu Mexika.