Wpływ spożycia żywności na mikroRNA związane z zespołem metabolicznym (EFCMRNAMS)

Projekt badania. To jest randomizowane badanie. Studenci pierwszego roku na Universidad Juárez Autónoma de Tabasco (UJAT) przechodzą kliniczne testy laboratoryjne w ramach procesu rekrutacji na uniwersytet. Pięćdziesiąt kobiet zostanie zaproszonych do udziału, ponieważ w DACS przeważają kobiety. Próbki krwi zostaną pobrane do analiz klinicznych i molekularnych na początku i na końcu protokołu (trzy miesiące). Pomiary antropometryczne zostaną wykonane również na początku i na końcu badania. W ciągu 3 miesięcy przez 5 dni w tygodniu serwowane będzie danie zawierające tradycyjne potrawy. Jedzenie będzie zawierało średnio 600 kcal, ≤ 50 mg cholesterolu, ≥ 10 g błonnika, ≥ 130 g warzyw i ≤ de 200 mg sodu. Do każdego dania dołączone będą 3 standardowe tortille kukurydziane. Grupa kontrolna otrzyma zwykle spożywane fast foody dostarczane przez stołówkę kampusu o podobnej proporcji kalorycznej (Muñoz i in., w druku)

Antropometria. Do wyznaczenia wskaźnika masy ciała (BMI) zgodnie z wytycznymi Światowej Organizacji Zdrowia (2011) wykorzystana zostanie waga kliniczna ze stadiometrem (Básculas Nuevo León®, Meksyk) o nośności 200 kg. Waga będzie kalibrowana codziennie przez cały okres rekrutacji studentów. BMI zostanie obliczone zgodnie z meksykańską normą NOM-043-SSA2-2011 (2012). Do pomiaru obwodu bioder i talii zostaną użyte milimetrowe taśmy nierozciągliwe z włókna szklanego o długości 1,80 m i szerokości 1 cm (Vitamex® Mexico). Dla populacji tego regionu pożądany obwód bioder dla kobiet to 80 cm, a dla mężczyzn 90 cm (WHO, 2011). Stosunek talii do bioder (WHR) oblicza się, dzieląc obwód talii przez obwód bioder, gdzie wartość 0,85 dla kobiet i 0,90 dla mężczyzn uważa się za granicę odcięcia (He i in., 2009). Stosunek talii do wzrostu (WHtR) oblicza się, dzieląc obwód talii przez wzrost, przy czym za pożądaną uważa się wartość poniżej 0,5 (WHO, 2011).

Parametry biochemiczne. Próbki krwi od uczestników zostaną pobrane przez personel laboratorium analiz klinicznych UJAT po 12-godzinnym okresie postu. Zostanie użyty sterylny sprzęt, a krew zostanie pobrana do probówek Vacutainer® Serum (BectonDickinson, Franklin Lakes, New Jersey, USA). Glukoza (GPA), triglicerydy (TG) i cholesterol całkowity (TC) zostaną zmierzone za pomocą suchej metodologii analitycznej w automatycznym urządzeniu VITROS® 250 (Ortho-Clinical Diagnostics Johnson & Johnson, Rochester, NY, USA). ten sam sprzęt będzie używany do wykonywania badań czynnościowych wątroby, albumin, globulin, fosfatazy alkalicznej, dehydrogenazy mlekowej, aminotransferazy asparaginianowej, aminotransferazy alaninowej.

Hemoglobina glikozylowana. Zostanie użyty zestaw odczynników Glycohemoglobin Pre-Fil firmy StanbioLab® (Boerne, Texas, USA). Dla każdego wzorca i próbki zakres absorbancji zostanie obliczony zgodnie ze wzorem dostarczonym przez producenta. Zastosowany zostanie współczynnik konwersji, a wyniki zostaną przedstawione jako HbA1c. Wartości od 4,2% do 6,2% będą uważane za normalne.

oznaczanie mikroRNA. Do oznaczenia miRNA zostaną użyte zestawy odczynników Quiagen®. Do uzyskania RNA zostanie użyty zestaw miRNeasly Serum/Plasma. Po oczyszczeniu RNA z próbek krwi zostanie przeprowadzona reakcja retrotranskryptazy oligo T przy użyciu zestawu miScript II RT i buforu miScript HiSpec. Następnie amplifikacja interesującej miARN zostanie przeprowadzona w termocyklerze czasu rzeczywistego z zestawem miScript miRNA do reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) Array Human Diabetes. Do wizualizacji amplikonów badacze użyją zestawu miScript SYBR Green PCR. Wyniki zostaną ocenione za pomocą oprogramowania termocyklera działającego w czasie rzeczywistym w celu zmierzenia różnic w poziomach transkrypcji. Termocykler będzie analizował przyrosty-spadki sygnałów wybranych miARN: miR-320, miR-33a/b, miR-145, miR-335 i miR-124a. Zastosowany zostanie test miScript Primer Assay firmy Quiagen®. Jako kontrole reakcji amplifikacji badacze wykorzystają mi-rtc jako kontrolę wydajności retrotranskryptazy i mir-3p z C. elegans jako kontrolę PCR.

Analiza statystyczna. Do przetwarzania danych używana będzie wersja 21.0 pakietu Statistics for the Social Sciences (SPSS, Chicago, Illinois, USA). Do analizy danych wykorzystane zostaną statystyki opisowe z tendencją centralną oraz tablice kontyngencji. Test dla powiązanych próbek zostanie wykorzystany do porównania zmiennych w grupach, zgodnie z markerami biochemicznymi i płcią uczestników, test korelacji Pearsona zostanie również wykorzystany do porównania zmiennych między grupami i płcią. Istotność statystyczna zostanie ustalona na poziomie p ≤ 0,05.

Względy etyczne. Badanie zostało przedłożone do zatwierdzenia Komisji ds. Badań i Etyki DACS w celu rejestracji w Wydziale Badań Universidad Juárez Autónoma de Tabasco pod kodem UJAT-DACS-2015-IA-08. Badanie jest zgodne z Deklaracją Helsińską Światowego Stowarzyszenia Lekarzy. Projekt jest zgodny z przepisami zawartymi w General Law on Health Research of Mexico.