Effect van voedselconsumptie op microRNA gerelateerd aan het metabool syndroom (EFCMRNAMS)

Studie ontwerp. Dit is een gerandomiseerde studie. Eerstejaarsstudenten aan de Universidad Juárez Autónoma de Tabasco (UJAT) worden onderworpen aan klinische laboratoriumtests als onderdeel van hun inschrijvingsproces bij de universiteit. Er zullen vijftig vrouwen worden uitgenodigd om deel te nemen, omdat de deelname van DACS overheerst wordt door vrouwen. Aan het begin en einde van het protocol (drie maanden) worden bloedmonsters genomen voor klinische en moleculaire analyses. Ook aan het begin en einde van de studie zullen antropometrische metingen worden uitgevoerd. Gedurende de 3 maanden wordt er 5 dagen per week een schotel met traditionele gerechten geserveerd. De voeding zal gemiddeld 600 Kcal, ≤ 50 mg cholesterol, ≥ 10 g vezels, ≥ 130 g groenten en ≤ de 200 mg natrium bevatten. Elk gerecht wordt vergezeld van 3 maïstortilla's van standaardformaat. De controlegroep krijgt gewoonlijk geconsumeerd fastfood aangeboden door de cafetaria van de campus met een vergelijkbare calorische verhouding (Muñoz et al., in druk)

Antropometrie. Om de body mass index (BMI) te bepalen, wordt volgens de richtlijnen van de Wereldgezondheidsorganisatie (2011) een klinische balans met een stadiometer (Básculas Nuevo León®, Mexico) met een weegvermogen van 200 kg gebruikt. De balans wordt dagelijks gekalibreerd gedurende de hele periode dat studenten worden aangeworven. De BMI wordt berekend volgens de Mexicaanse norm NOM-043-SSA2-2011 (2012). Om de heup- en tailleomtrek te meten, zullen millimetermetrische niet-rekbare glasvezelbanden worden gebruikt, met een lengte van 1,80 m en een breedte van 1 cm (Vitamex® Mexico). Voor de bevolking van deze regio is de gewenste heupmaat voor vrouwen 80 cm en voor mannen 90 cm (WHO, 2011). De taille/heup ratio (WHR) wordt berekend door de tailleomtrek te delen door de heupomtrek, waarbij een waarde van 0,85 voor vrouwen en van 0,90 voor mannen als afkapwaarden worden beschouwd (He et al., 2009). De waist-to-height ratio (WHtR) wordt berekend door de taillemaat te delen door die van de lengte, waarbij een waarde lager dan 0,5 wenselijk wordt geacht (WHO, 2011).

Biochemische parameters. Bloedmonsters van deelnemers zullen worden verkregen door personeel van het laboratorium voor klinische analyse van UJAT na een vastenperiode van 12 uur. Er zal steriele apparatuur worden gebruikt en bloed zal worden verzameld in Vacutainer® Serum-buizen (BectonDickinson, Franklin Lakes, New Jersey, VS). Glucose (GPA), triglyceriden (TG) en totaal cholesterol (TC) zullen worden gemeten door middel van een droge analytische methode in een geautomatiseerd apparaat VITROS® 250 (Ortho-Clinical Diagnostics Johnson & Johnson, Rochester, NY, VS). dezelfde apparatuur zal worden gebruikt om leverfunctietesten uit te voeren, albumine, globulinen, alkalische fosfatase, melkzuurdehydrogenase, aspartaataminotransferase, alanineaminotransferase.

Geglycosyleerd hemoglobine. De Glycohemoglobine Pre-Fil van StanbioLab®-reagentiakit (Boerne, Texas, VS) zal worden gebruikt. Voor elke standaard en elk monster wordt het absorptiebereik berekend volgens de formule van de fabrikant. De conversiefactor wordt gebruikt en de resultaten worden gerapporteerd als HbA1c. Waarden tussen 4,2% en 6,2% worden als normaal beschouwd.

microRNA-bepaling. Voor de bepaling van miRNA zullen de reagenskits van Quiagen® gebruikt worden. De kit miRNeasly Serum/Plasma wordt gebruikt om het RNA te verkrijgen. Zodra het RNA uit de bloedmonsters is gezuiverd, wordt de oligo-T-retrotranscriptasereactie uitgevoerd met behulp van de miScript II RT-kit en de buffer miScript HiSpec. Daarna zal de amplificatie van de miARN van interesse worden gemaakt in een real-time thermocycler met de miScript miRNA polimerase kettingreactie (PCR) Array Human Diabetes kit. Om amplicons te visualiseren, zullen de onderzoekers de miScript SYBR Green PCR-kit gebruiken. De resultaten zullen worden beoordeeld met de software van de real-time thermocycler om verschillen in transcriptieniveaus te meten. De thermocycler analyseert de verhogingen-verlagingen in de signalen van de geselecteerde miARN: miR-320, miR-33a/b, miR-145, miR-335 en miR-124a. Er wordt gebruik gemaakt van de miScript Primer Assay van Quiagen®. Als controles van de amplificatiereacties zullen de onderzoekers mi-rtc gebruiken als controle van de efficiëntie van de retrotranscriptase en mir-3p van C. elegans als een PCR-controle.

Statistische analyse. Voor de gegevensverwerking wordt versie 21.0 van het Statistics Package for the Social Sciences (SPSS, Chicago, Illinois, USA) gebruikt. Voor data-analyse wordt gebruik gemaakt van beschrijvende statistiek met centrale tendens en contingentietabellen. De test voor gerelateerde steekproeven zal worden gebruikt om variabelen in de groepen te vergelijken, volgens de biochemische markers en het geslacht van de deelnemers. De correlatietest van Pearson zal ook worden gebruikt om variabelen tussen groepen en geslacht te vergelijken. De statistische significantie wordt vastgesteld op p ≤ 0,05.

Ethische overwegingen. De studie werd ter goedkeuring voorgelegd aan de Research and Ethics Committees van de DACS om te worden geregistreerd bij de Research Division van de Universidad Juárez Autónoma de Tabasco, code UJAT-DACS-2015-IA-08. De studie voldoet aan de Helsinki Declaration van de World Medical Association. Het ontwerp voldoet aan de voorschriften van de Algemene Wet op Gezondheidsonderzoek van Mexico.